Development of non radioactive nucleic acid hybridization assays for the detection of prokaryotes affecting sugarcane | Desarrollo de ensayos de hibridación de ácidos nucleicos no radiactivos para la detección de procariontes que afectan la caña de azúcar

anglais. Leaf scald (Xanthomonas albilineans), ratoon stunt (Leifsonia xyli subsp. xyli) and yellow leaf syndrome (SCYLP) are considered among the main sugarcane diseases in Cuba and world-wide. A non radioactive nucleic acid hybridization methodology (nrNAH) was developed for the simultaneous diagnosis of these diseases. Cuban sugarcane varieties with typical yellow leaf symptoms, previously confirmed as infected by phytoplasmas by using nPCR/HaeIII, and 40 samples corresponding to isolates and infected sugarcane juices with X. albilineans and L. xyli, from Brazil and Cuba were studied. Probes of 229, 309 and 1000 bp were obtained and evaluated by the system of direct alkaline phosphatase labelling and chemiluminiscent detection (AlkPhos, Amersham LIFE SCIENCE, UK) for the specific and simultaneous detection of X. albilineans, L. xyli, and ScYLP, respectively. Either X. albilineans/L. xyli, or X. albilineans/L. xyli/SCYLP probe pools yielded specific hybridization signals reacting with reference controls and samples infected with the three plant pathogens. The practical use of the system for the simultaneous detection of these important sugarcane diseases was evidenced, and it is considered a valuable diagnostic tool for the different national phytosanitary surveillance, seed certification and breeding programs.

espagnol; castillan. Entre las principales enfermedades que afectan la caña de azúcar en Cuba y el mundo se encuentran la escaldadura foliar (Xanthomonas albilineans), el raquitismo de los retoños (Leifsonia xyli subsp. xyli) y el síndrome del amarilleamiento foliar (SCYLP). Se desarrolló una metodología basada en el empleo de la hibridación no radioactiva de ácidos nucleicos (HANnr) para el diagnóstico simultáneo de estas enfermedades. Se emplearon variedades cubanas de caña de azúcar con síntomas típicos de amarilleamiento foliar, previamente confirmadas como infectadas por fitoplasmas mediante nPCR/ HaeIII y 40 muestras correspondientes a aislamientos y jugos de caña infectados con X. albilineans y L. xyli, procedentes de Brasil y Cuba. Se obtuvieron sondas de 229, 309 y 1000 bp y se evaluaron mediante el sistema de marcaje directo con fosfatasa alcalina y detección quimioluminiscente (AlkPhos, Amersham LIFE SCIENCE, UK) para la detección específica y simultánea de X. albilineans, L. xyli, y ScYLP, respectivamente. Se obtuvieron señales de hibridación nítidas y bien definidas con la mezcla de sondas tanto X. albilineans/L. xyli, como X. albilineans/L. xyli, /SCYLP, las cuales reaccionaron de forma específica con los controles de referencia y las muestras infectadas con estas tres patologías. Se evidenció la utilidad práctica del sistema obtenido para la detección simultánea de estas importantes enfermedades de la caña de azúcar, el cual constituye una herramienta de indiscutible valor diagnóstico para los diferentes programas de vigilancia fitosanitaria, evaluación, certificación de semilla y mejoramiento genético del país.