Extraction and purification of large dsRNAs from virus-infected plants and fungi; applications in virus detection and identification

espagnol; castillan. Resumen. Se utilizan varios métodos para realizar la extracción y purificación de ARN de doble cadena (dsRNA) largo de plantas y hongos. Los protocolos más utilizados consisten en la extracción de fenol y la unión selectiva de dsRNA a la celulosa. Los dsRNAs virales purificados de plantas y hongos se han analizado por electroforesis con gel y se han utilizado como herramienta complementaria para identificar virus. Asimismo, los dsRNAs se han utilizado como reactivos en PCR de transcriptasa reversa, clonación molecular, preparación de sondas y secuenciación de virus ARN. Se han descubierto muchos virus ARN y moléculas subvirales que infectan plantas y hongos utilizando protocolos de extracción de dsRNA. Las recientes mejoras a los métodos de extracción de dsRNA han aumentado la eficiencia y la rentabilidad. Se ha comprobado que el dsRNA viral se puede utilizar como reactivo inicial para la secuenciación de próxima generación de genomas virales.

anglais. Abstract. Various methods for the extraction and purification of large dsRNAs are used to conduct detection and identification of viruses in plants and fungi. The most widely used protocol consists in phenol extraction and selective binding of dsRNA to cellulose. Purified viral dsRNAs from plants and fungi have been analyzed by gel electrophoresis and used as a complementary tool for virus identification. Moreover, dsRNAs have been used as reagent for reverse transcription PCR, molecular cloning, preparation of probes, and sequencing of RNA viruses. Many RNA viruses and subviral molecules infecting plants and fungi have been discovered using dsRNA extraction protocols. Recent improvements on dsRNA extraction methods have increased their efficiency, and cost effectiveness. It has been shown that viral dsRNA can be used as an initial reagent for next generation sequencing of viral genomes.