A simple, polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism-aided diagnosis method for pine wilt disease
2000
Iwahori, H. | Kanzaki, N. | Futai, K.
allemand. Zur Diagnose der Kiefernwelke wurde eine einfache PCR-RFLP-Methode entwickelt, mit der zwei Shnliche Nematoden-Arten (Bursaphelenchus xylophilus und Bursaphelenchus mucronatus) auf der Basis von einzelnen lebenden oder konservierten Individuen unterschieden werden k÷nnen. Ein einzelner Nematode wurde in 1 Mikroliter destilliertem Wasser aufgenommen und auf einen ObjekttrSger gebracht. Wenn das Wasser weitgehend aufgetrocknet war, wurde der Nematode mit einem 1,5 mm x 1,5 mm gro¯en Filterpapierstnck mit Hilfe einer Pinzette zerquetscht. Das Filterpapier mit den Nematodennberresten wurde sofort als DNA-Template in den PCR-Puffer gegeben. Es wurden Primer verwendet, die die ITS1-Region, die 5,8S-Region und die ITS2-Region der ribosomalen DNS amplifizieren. Das PCR-Produkt wurde in der Regel von einem einzelnen Nematoden erhalten und die Digestion des Produktes mit der Restriktionsendonuklease Hinf I erlaubte die Unterscheidung zwischen B. xylophilus und B. mucronatus. Diese Methode zur Diagnose des Erregers der Kiefernwelke ist einfach und zuverlSssig. Sie konnte auch bei Nematoden angewendet werden, die unter verschiedenen Bedingungen konserviert waren, nicht jedoch bei Verwendung aldehydhaltiger Fixiermittel.
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