A combination of baiting and PCR techniques for the detection of Phytophthora quercina and P. citricola in soil samples from oak stands
2001
Nechwatal, J. | Schlenzig, A. | Jung, T. | Cooke, D.E.L. | Duncan, J.M. | Osswald, W.F.
allemand. Es wird der spezifische Nachweis von Phytophthora quercina und P. citricola in Bodenproben von absterbenden Eichen mit Hilfe einer Kombination von PCR- Reaktionen mit artspezifischen Primern erlaubten den Nachweis von P. quercina und P. citricola in den infizierten Eichenblaettern aus diesen Tests und im jeweiligen 'Baiting-Wasser'. Der PCR- und Baiting-Methoden beschrieben. Die Bodenproben wurden mit Wasser geflutet und Baiting-Tests unterzogen, bei denen junge Blaettchen von Quercus robur als Koeder zum Einsatz kamen. Einfache oder nested PCR-Nachweis beider Erreger war auch moeglich, wenn Bodenproben gruendlich mit Wasser gemischt wurden, das aufgeschwemmte organische Material abgesammelt und das Wasser abgenommen wurde. P. quercina und P. citricola wurden dabei in nahezu allen Faellen im Wasser, jedoch weniger regelmaessig im organischen Material nachgewiesen. Die Identitaet der betreffenden Arten wurde zusaetzlich durch Restriktions-Analysen der entsprechenden Amplicons bestaetigt. Ausserdem wurde die Anwesenheit beider Arten in den untersuchten Bodenproben durch klassische Baiting-Methoden nachgewiesen. Nested PCR mit den verwendeten Primaerpaaren erlaubte den Nachweis von nur 5 Zoosporen von P. citricola und 300 Zoosporen von P. quercina in einem Gesamt-Volumen von 100 My l. Die beschriebenen Methoden ermoeglichen Nachweis und Identifizierung von Phytophthora-Arten in Bodenproben, ohne die Notwendigkeit einer direkten Extraktion des Bodens und ohne weitreichende Kenntnis der morphologischen Merkmale der Arten dieser Gattung.
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