Efecto de la L-carnitina sobre la criosupervivencia y capacidad fecundante de espermatozoides epididimarios caninos congelados y vitrificados

El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de la L-carnitina adicionada a diluyentes de congelación y vitrificación, sobre la criosupervivencia y capacidad fecundante en esperma epididimario de perro. Para esto, se recuperó el esperma de 60 epidídimos provenientes de 30 perros adultos orquiectomizados mediante flujo retrógrado. Posteriormente se conformaron veinte agrupaciones o pools de esperma (3 muestras epididimarias/pool). Cada pool se dividió en 2 alícuotas, una para congelación y otra para vitrificación. Para la congelación, se usó el diluyente TCG-EY (Tris, ácido cítrico, glucosa, 20% yema de huevo) y 5% de glicerol y se suplementó con 5mM (T1) y 0mM (T2, control 1) de L-carnitina; y para la vitrificación se usó el diluyente TCG-EY y 250 mM de sacarosa y se suplementó con 5 mM (T3) y 0 mM (T4, control 2) de L-carnitina. La cinemática, integridad de las membranas y capacidad fecundante fue evaluada de las muestras espermáticas de los tratamientos T1, T2, T3 y T4, mediante un sistema computarizado CASA (SCA®- 2018), doble tinción fluorescente PI-PNA-FITC y FIV heteróloga (ovocitos bovinos), respectivamente. Después de la criopreservación, los resultados demostraron que el método de congelación produjo valores más altos (P<0,05) de motilidad progresiva (MP), velocidad curvilínea (VCL) y rectilínea (VSL), y frecuencia de batida de flagelo (BCF) que el método de vitrificación, independientemente de la adición de L-carnitina. La L-carnitina no mejoró (P>0,05) ningún parámetro cinemático de espermatozoides congelados o vitrificados. Sin embargo, L-carnitina, evidenció un efecto crioprotector debido a un incremento (P < 0,05) del porcentaje de espermatozoides con membrana plasmática intacta y acrosoma intacto después del proceso de congelación y vitrificación. En la evaluación de la capacidad fecundante, se evidenció que las muestras congeladas con L-carnitina obtuvieron una mayor proporción pronúcleos formados comparados con muestras vitrificadas sin L-carnitina (P < 0,05). En conclusión, la adición de L-carnitina a los diluyentes de congelación y vitrificación, demostró un efecto benéfico crioprotector del plasmalema y acrosoma, incluso de la capacidad fecundante de espermatozoides epididimarios de perro.

This work aimed to evaluate the effect of L-carnitine added to freezing and vitrification mediums on cryosurvival and fertilizing ability of dog epididymal spermatozoa. For this purpose, sperm was recovered from 60 epididymides from 30 ovariectomized adult dogs by retrograde flushing. Subsequently, twenty pool sperm samples were formed (3 epididymal samples/pool). Each pool was divided into two aliquots: one for freezing, and another for vitrification. For the freezing process, the TCG-EY extender (Tris, citric acid, glucose, 20% egg yolk) with 5% glycerol and supplemented with 5mM (T1) and 0mM (T2, control 1) L-carnitine were used. For the vitrification process, the TCG-EY extender plus 250 mM sucrose and supplemented with 5 mM (T3) and 0 mM (T4, control 2) of L-carnitine were utilized. The kinematics, membrane integrities, and fertilizing ability of all sperm samples (T1 - T4) were assessed using a CASA system (SCA®-2018), PI-PNA-FITC double fluorescence test, and heterologous in vitro fertilization (IVF) with zona-intact bovine oocytes, respectively. After cryopreservation, the results showed that the freezing method yielded greater values (P<0.05) of progressive motility (PM), curvilinear (VCL) and rectilinear (VSL) velocities, and beat-cross frequency (BCF) than the vitrification method, irrespective of L-carnitine addition. L-carnitine did not improve (P>0.05) any kinematic variables of frozen or vitrified sperm. However, L-carnitine showed a cryoprotective effect due to an improvement (P < 0.05) in the proportion of sperm with intact plasma membrane/intact acrosome after the freezing and vitrification process. Concerning fertilizing ability, it was evidenced that the samples frozen with L-carnitine obtained a higher proportion of pronuclei formed compared to vitrified samples without L-carnitine. In conclusion, the addition of L-carnitine to the freezing and vitrification mediums has a positive cryoprotective effect on the plasmalemma and acrosome membrane, even fertilizing ability of dog epididymal spermatozoa.

Médico Veterinario Zootecnista

Cuenca