Systematic analysis of TruSeq, SMARTer and SMARTer Ultra-Low RNA-seq kits for standard, low and ultra-low quantity samples.
2019
Palomares, Marie-Ange | Dalmasso, Cyril | Bonnet, Eric | Derbois, Céline | Brohard-Julien, Solène | Ambroise, Christophe | Battail, Christophe | Deleuze, Jean-François | Olaso, Robert, E | Laboratoire de Mathématiques et Modélisation d'Evry (LaMME) ; Institut National de la Recherche Agronomique (INRA)-Ecole Nationale Supérieure d'Informatique pour l'Industrie et l'Entreprise (ENSIIE)-Université d'Évry-Val-d'Essonne (UEVE)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) | Centre National de Recherche en Génomique Humaine (CNRGH) ; Institut de Biologie François JACOB (JACOB) ; Direction de Recherche Fondamentale (CEA) (DRF (CEA)) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Direction de Recherche Fondamentale (CEA) (DRF (CEA)) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA) | Centre National de Génotypage (CNG) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA) | Institut de Biologie François JACOB (JACOB) ; Direction de Recherche Fondamentale (CEA) (DRF (CEA)) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA) | Institut de Génomique d'Evry (IG) ; Université Paris-Saclay-Institut de Biologie François JACOB (JACOB) ; Direction de Recherche Fondamentale (CEA) (DRF (CEA)) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Direction de Recherche Fondamentale (CEA) (DRF (CEA)) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)
International audience
Afficher plus [+] Moins [-]anglais. High-throughput RNA-sequencing has become the gold standard method for whole-transcriptome gene expression analysis, and is widely used in numerous applications to study cell and tissue transcriptomes. It is also being increasingly used in a number of clinical applications, including expression profiling for diagnostics and alternative transcript detection. However, despite its many advantages, RNA sequencing can be challenging in some situations, for instance in cases of low input amounts or degraded RNA samples. Several protocols have been proposed to overcome these challenges, and many are available as commercial kits. In this study, we systematically test three recent commercial technologies for RNA-seq library preparation (TruSeq, SMARTer and SMARTer Ultra-Low) on human biological reference materials, using standard (1 mg), low (100 ng and 10 ng) and ultra-low (<1 ng) input amounts, and for mRNA and total RNA, stranded and unstranded. The results are analyzed using read quality and alignment metrics, gene detection and differential gene expression metrics. Overall, we show that the TruSeq kit performs well with an input amount of 100 ng, while the SMARTer kit shows decreased performance for inputs of 100 and 10 ng, and the SMARTer Ultra-Low kit performs relatively well for input amounts <1 ng. All the results are discussed in detail, and we provide guidelines for biologists for the selection of an RNA-seq library preparation kit.
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Cette notice bibliographique a été fournie par Institut national de la recherche agronomique
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