ANÁLISIS DE LOS PORCENTAJES DE CÉLULAS CD8+CCR7-CD45RA+CX3CR1+ EN SANGRE PERIFÉRICA DE MUJERES CON NEOPLASIA INTRAEPITELIAL DE CÉRVIX I (NIC-I)

RESUMEN Para determinar si existe actividad citotóxica o no, en las células T CD8+ con fenotipo EMRA, de las lesiones precursoras de cáncer cérvico uterino (CaCU), es necesario realizar trabajos que incluyan al marcador de activación CX3CR1 el cual está relacionado con el nivel de citotoxicidad de estas células. Esta información es importante para conocer más sobre el efecto del virus del papiloma humano (VPH) en la respuesta inmune de mujeres con neoplasia intraepitelial de grado I (NIC-I), ya que ésta es la primera etapa que puede llevar a la progresión del CaCU. En este estudio se analizaron los linfocitos en sangre periférica de grupos de mujeres con NIC-I y mujeres sanas con un rango de edades de 18 – 45 años. Se realizó citometría de flujo en ambos grupos, se compararon los porcentajes de células T CD8+ con fenotipo EMRA y se derivaron subpoblaciones en células T CD8+totales/bright/dim con los fenotipos EMRAbright/dim positivas al marcador de activación CX3CR1 para determinar también sus porcentajes. El grupo de mujeres con NIC-I, no mostró diferencias significativas con respecto a las mujeres control en las células T CD8totales EMRA activadas ni con las células T CD8bright EMRAbright activadas y sin activar. Sin embargo si mostró diferencias en las células T CD8totales/bright EMRAnull. Así mismo, no hubo diferencias significativas en las células T CD8dim EMRAbright activadas y sin activar. El porcentaje de células T CD8bright EMRAbright activadas, presentó una tendencia a ser significativa en mujeres control con respecto al de las mujeres con NIC-I. El incremento de las células T CD8totales/bright EMRA- quizás se deba a que pueden estar desempeñando un papel importante en la recuperación de la respuesta inmune. Para el caso de las células T CD8bright EMRAbright activadas, podría indicar que las mujeres con NIC-I tienen una capacidad de respuesta citotóxica disminuida debido a la infección por VPH.

INDICE Abreviaturas y Símbolos .................................................................................................... 9 RESUMEN ....................................................................................................................... 11 1 INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 12 2 MARCO TEÓRICO ....................................................................................................... 14 2.1 Virus del papiloma humano (VPH).......................................................................... 14 2.2 Cáncer cérvico uterino (CaCU) ............................................................................... 14 2.2.1 Epidemiología .................................................................................................. 14 2.2.2 Infección del VPH en cérvix ............................................................................. 15 2.2.3 Sistemas de diagnóstico de CaCU ................................................................... 15 2.3 Respuesta inmune ................................................................................................. 17 2.3.1 Inmunidad innata y adaptativa ......................................................................... 17 2.3.2 Células asesinas naturales (NK) ...................................................................... 18 2.3.3 Función de los marcadores CCR7 y CD45RA .................................................. 19 2.3.4 Función del marcador CX3CR1 ....................................................................... 19 2.4 Citometría de Flujo ................................................................................................. 20 2.4.1 Fundamento ..................................................................................................... 20 2.4.2 Aplicación de la Citometría de Flujo en la Inmunología .................................... 21 3 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ........................................................................... 22 4 JUSTIFICACIÓN ........................................................................................................... 23 5 OBJETIVO .................................................................................................................... 24 5.1 General ...................................................................................................................... 24 5.2 Particulares ................................................................................................................ 24 6 HIPOTESIS................................................................................................................... 24 7 MATERIALES Y MÉTODO .......................................................................................... 25 7.1 Diagrama del estudio.............................................................................................. 25 7.2 Lugar de la investigación. ...................................................................................... 26 7.3 Tipo de investigación .............................................................................................. 26 7.4 Aspectos Bioéticos ................................................................................................. 26 7.4.1 NOM-012-SSA3-2012 ...................................................................................... 26 7.4.2 NOM-004-SSA3-2012 ...................................................................................... 27 7.4.3 NOM-253-SSA1-2012 ...................................................................................... 27 7.4.4 NOM-087-ECOL-SSA1-2002 ........................................................................... 27 7.5 Criterios aplicados a las mujeres del estudio .......................................................... 27 7.5.1 Criterios de inclusión ........................................................................................ 27 7.5.2 Criterios de exclusión ....................................................................................... 28 7.5.3 Criterios de eliminación .................................................................................... 28 7.6 Reactivos ............................................................................................................... 28 7.7 Material Biológico ................................................................................................... 29 7.8 Selección de la muestra ......................................................................................... 29 7.9 Variables ................................................................................................................ 29 7.9.1 Independientes ................................................................................................ 29 7.9.2 Dependientes ................................................................................................... 29 7.10 Desarrollo del trabajo ........................................................................................... 30 7.10.1 Selección de mujeres participantes en el estudio ........................................... 30 7.10.2 Toma de muestra ........................................................................................... 30 7.10.3 Procesamiento de la muestra de sangre (marcaje y fijación) ......................... 30 7.10.4 Adquisición de células por Citometría de Flujo ............................................... 31 7.10.5 Análisis de células adquiridas ........................................................................ 31 7.11 Análisis de resultados ........................................................................................... 32 8 Resultados .................................................................................................................... 35 9 Discusión ...................................................................................................................... 42 10 Conclusiones .............................................................................................................. 45 11. REFERENCIAS ......................................................................................................... 46 12 ANEXOS ..................................................................................................................... 49 12.1 Carta de consentimiento informado ...................................................................... 49 12.2 Materiales ............................................................................................................. 51