Efecto del cuerpo lúteo sobre la expresión de genes marcadores de calidad celular en ovocitos y células del cúmulus equinos sometidos a maduración in vitro

Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de la presencia y localización del cuerpo lúteo (CL) sobre la expresión relativa de genes asociados a calidad celular en ovocitos y células del cúmulus equinas sometidas a maduración in vitro. Se colectaron pares de ovarios de animales sacrificados y fueron clasificados en tres grupos: Ovarios con CL (CL+); ovarios sin CL, pero provenientes de un animal con CL en el ovario contralateral (CL-) y; ovarios de animales sin cuerpo lúteo (NCL). Seguidamente, los complejos cúmulus-ovocitos (CCOs) fueron recuperados mediante curetaje y lavado de pared folicular con solución PBS suplementada con 1% de PVA. Grupos de 10 CCOs recuperados de cada grupo experimental fueron puestos en 100 µL de medio DMEM F-12 (20% de SFB) y madurados en incubadora a 38,5°C y 5 % de CO2, durante 36 h. Posteriormente, las células del cúmulus fueron separadas de los ovocitos mediante pipeteo repetitivo. La extracción del ARN de las muestras fue realizada con el uso de TRIzol®️ (Invitrogen-ThermoFisher). El ADN complementario (ADNc) se obtuvo utilizando el kit comercial de transcripción de alta capacidad®️ (Applied Biosystems®️) y la amplificación de los genes BMP-15, BAX, ODC1, GDF9 y AURKA se realizó mediante q-PCR y el kit comercial Master Mix SYBR GREEN®️ PCR (Applied Biosystems®️). En los ovocitos, fue observada una mayor expresión para el gen BMP-15 en el grupo CL+ en comparación con el grupo NCL (P = 0,0447). Adicionalmente, en las células del cúmulus, se observó mayor expresión de GDF9 en el grupo CL+ en relación al grupo NCL (P = 0.0177). Para el restante de genes no fueron observadas diferencias entre grupos. En conclusión, los resultados sugieren que la presencia del CL favorece la expresión de genes relacionados con mayor calidad celular en ovocitos y células del cúmulus equinas sometidas a maduración in vitro.

This study aimed to evaluate the effect of the presence and localization of the corpus luteum (CL) on the relative expression of genes associated with cell quality in equine oocytes and cumulus cells after in vitro maturation. Pairs of ovaries from slaughtered animals were collected and classified into three groups: ovaries with CL (CL+); ovaries without CL but coming from an animal with CL at the contralateral ovary (CL-) and ovaries from animals without corpus luteum (NCL). Then, cumulus-oocyte complexes (COCs) were recovered by curettage and follicular wall washing with PBS solution supplemented with 1% PVA. Groups of 10 COCs from each experimental group were placed in 100 µL of DMEM F-12 medium (20% of SFB) and matured in incubator at 38.5°C and 5% CO2, during 36 h. Subsequently, the cumulus cells were separated from the oocytes by repetitive pipetting. The RNA extraction of the samples was performed with the use of TRIzol®️ (Invitrogen-ThermoFisher). Complementary DNA (cDNA) was obtained using the commercial high-capacity transcription kit®️ (Applied Biosystems®️) and the amplification of the genes BMP-15, BAX, ODC1, GDF9 and AURKA was performed by q-PCR and the commercial Master Mix SYBR GREEN®️ PCR kit (Applied Biosystems®️). In oocytes, a higher expression for the BMP-15 gene was observed in the CL+ group compared to the NCL group (P = 0,0447). In addition, in cumulus cells, greater expression of GDF9 was observed among the CL+ group, compared with the NCL group (P = 0.0177). For the remaining genes no differences were observed between groups. In conclusion, the results suggest that the presence of CL favors the expression of genes related to higher cell quality in oocytes and cumulus cells of equine after in vitro maturation.

Incluye bibliografía

Pregrado

Médico(a) Veterinario Zootecnista

Medicina Veterinaria y Zootecnia

Salud Humana y Animal