Determinación de la prevalencia de infección por anaplasma marginale en bovinos criollos colombianos mediante el uso de técnicas moleculares para contribuir en la preservación del recurso genético

La ganadería colombiana ha demostrado valiosos avances durante los últimos años, en cuanto a su desarrollo, contando actualmente con 29.301.392 cabezas de ganado según el Instituto Colombiano Agropecuario (ICA) en el presente año. En la ganadería colombiana Anaplasma marginale es el agente patógeno transmitido por vectores (VBP) más prevalente, ocasionando pérdidas económicas de aproximadamente USD 4.2 millones por año. La problemática que representa A.marginale para la salud animal y para la ganadería es sumamente relevante a causa de las secuelas que provoca, tanto en la parte reproductiva como productiva en el animal que la padece. El objetivo de este estudio es determinar la prevalencia de infección y características epidemiológicas asociadas a la infección natural por A.marginale, en ganado criollo colombiano mediante el uso de técnicas moleculares con la finalidad de contribuir a la preservación genética de dichas razas que actualmente se encuentran catalogadas en peligro de extinción. Este estudio se lleva a cabo en los departamentos de Arauca, Meta y Santander, los cuales representan el 18% del hato nacional. El tipo de estudio realizado es de tipo transversal en el que la unidad de muestreo corresponde a 30 predios certificados como criadores de las razas anteriormente mencionadas. Para la toma de muestras, se toman dos muestras de sangre por cada animal, las cuales serán recolectadas utilizando tubos vacutainer (Improve, CN®) con y sin EDTA y almacenados a 4°C. Por cada animal, un volumen de 200 µl de sangre con EDTA es sometido a un procedimiento de extracción de ADN total. El ADN obtenido es diluido en un volumen de 100ul de buffer de elución, cuantificado en un espectrofotómetro, y almacenado a -20°C. Para el diagnóstico molecular se lleva a cabo una sn-PCR dirigida al gen msp5. Las muestras de la segunda PCR son analizadas por medio de la técnica de electroforesis de gel de agarosa al 2%, teñidos con GelRed para finalmente visualizarlo bajo luz UV. Las preparaciones de muestra se consideran positivas cuando se observa una banda de 345 bp en la electroforesis. A partir de los datos obtenidos se realiza una base de datos empleando el programa Excel v.14.0, con el fin de determinar el grado de significancia de las características clínicas y epidemiológicas, un índice será calculado a partir de los datos obtenidos en cada uno de los métodos. Un P <0.05 será considerado significativo. Todos los análisis estadísticos se calcularon y graficaron mediane el software estadístico SPSS v.25.0. Con este estudio se proporcionó información importante sobre la prevalencia, variables epidemiológicas y características clínicas asociadas a la infección por A.marginale en bovinos criollos de diferentes razas en Colombia. Estos hallazgos resaltan la importancia de considerar factores como la anemia, la fiebre y la ubicación geográfica al evaluar la prevalencia y el manejo de la anaplasmosis bovina. Así mismo, es de interés brindar información relevante para el desarrollo de estrategias de control y prevención de la anaplasmosis bovina, e incentivar a realizar estudios continuos para monitorear la prevalencia y comprender mejor los factores asociados a esta enfermedad.

Colombian livestock has shown valuable progress in recent years, in terms of its development, currently having 29,301,392 head of cattle according to the Colombian Agricultural Institute (ICA) this year. In Colombian livestock, Anaplasma marginale is the most prevalent vector-borne pathogen (VBP), causing economic losses of approximately USD 4.2 million per year. The problem that A.marginale represents for animal health and for livestock is extremely relevant due to the sequelae it causes, both in the reproductive and productive parts of the animal that suffers from it. The objective of this study is to determine the prevalence of infection and epidemiological characteristics associated with natural infection by A.marginale, in Colombian Creole cattle through the use of molecular techniques in order to contribute to the genetic preservation of these breeds that are currently cataloged. in danger of extinction. This study is carried out in the departments of Arauca, Meta and Santander, which represent 18% of the national herd. The type of study carried out is cross-sectional in which the sampling unit corresponds to 30 farms certified as breeders of the aforementioned breeds. For sampling, two blood samples are taken from each animal, which will be collected using vacutainer tubes (Improve, CN®) with and without EDTA and stored at 4°C. For each animal, a 200 µl volume of EDTA blood is subjected to a total DNA extraction procedure. The obtained DNA is diluted in a 100ul volume of elution buffer, quantified in a spectrophotometer, and stored at -20°C. For molecular diagnosis, sn-PCR targeting the msp5 gene is carried out. The samples of the second PCR are analyzed by means of the 2% agarose gel electrophoresis technique, stained with GelRed to finally visualize it under UV light. Sample preparations are considered positive when a 345 bp band is observed on electrophoresis. From the data obtained, a database is made using the Excel v.14.0 program, to determine the degree of significance of the clinical and epidemiological characteristics, an index will be calculated from the data obtained in each of the methods. A P < 0.05 will be considered significant. All statistical analyzes were calculated and graphed using the statistical software SPSS v.25.0. This study provided important information on the prevalence, epidemiological variables, and clinical characteristics associated with A.marginale infection in criollo cattle of different breeds in Colombia. These findings highlight the importance of considering factors such as anemia, fever, and geographic location when evaluating the prevalence and management of bovine anaplasmosis. Likewise, it is of interest to provide relevant information for the development of control and prevention strategies for bovine anaplasmosis and encourage continuous studies to monitor the prevalence and better understand the factors associated with this disease.

1. Introducción. -- 2. Marco Conceptual. -- 2.1 Anaplasma marginale. -- 2.2 Patogenia. -- 2.3 Transmisión de A. marginale. -- 2.4 Métodos diagnósticos para la detección de A. marginale. -- 2.5 Razas Bovinas Criollas Colombianas. -- 3 Estado del arte. -- 4 Objetivos. -- 4.1 Objetivo General. -- 4.2 Objetivos Específicos. -- 5 Metodología. -- 5.1 Descripción del área de investigación. -- 5.2 Tipo de estudio y diseño de muestra. -- 5.3 Toma de muestras sanguíneas. -- 5.4 Procesamiento de muestras sanguíneas. -- 5.5 Diagnóstico molecular de A. marginale. --5.6 Caracterización de datos. -- 5.7 Análisis Estadístico. -- 6 Resultados. -- 6.1 Variables Epidemiológicas. -- 6.1.1 Prevalencia de infección por Raza. -- 6.1.2 Prevalencia de infección por Sexo y Edad. -- 6.1.3 Clima. -- 6.1.4 Municipio. -- 6.1.5 Departamentos. -- 6.2 Características Clínicas. -- 6.2.1 Hematocrito. -- 6.2.2 Condición Corporal. -- 6.2.3 Temperatura. -- 7 Discusión. -- 8 Conclusiones. -- 9. Referencias.

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Medico Veterinario