Efeito do período de glicerolização na viabilidade espermática do sémen descongelado de carneiros de raça campaniça

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária, na área científica de Clínica

O período de glicerolização é um passo fundamental no processo de criopreservação do sémen, permitindo a estabilização das membranas espermáticas e garantindo um eficaz efeito crioprotetor, por parte do glicerol. No presente trabalho foi feita a recolha de sémen, por eletroejaculação, de 7 carneiros de raça Campaniça. Foram congeladas 12 mini-palhinhas de sémen, a partir desses ejaculados, utilizando períodos de glicerolização de 1, 2 e 4 horas. Este desenho experimental teve como principal objetivo estudar o efeito das diferentes durações deste período na viabilidade espermática do sémen de carneiros de raça Campaniça, após a descongelação. Para tal, foram utilizados 3 métodos subjetivos de avaliação seminal, a avaliação microscópica da Motilidade Individual Progressiva (MIP) à descongelação, o Teste Hiposmótico (HOST) e o Teste de Termorresistência (TTR). Estes permitiram averiguar o tipo de movimento dos espermatozoides, a integridade estrutural e funcional das suas membranas celulares e a resistência dos mesmos ao ambiente do trato genital feminino. Foi ainda realizada uma determinação objetiva, através de um sistema de Análise Computorizada do Sémen (CASA), que fornece informação precisa e detalhada acerca do perfil cinético de cada espermatozoide, bem como da distribuição das subpopulações espermáticas de cada amostra. Os resultados obtidos para todos os testes foram superiores quando utilizado um período de glicerolização de 4 horas, seguidos dos correspondentes às 2 horas e com os piores valores associados a 1 hora de duração. Através da aplicação de um modelo linear generalizado misto, foram detetadas diferenças estatisticamente significativas entre os diferentes períodos de glicerolização, para todos os testes seminais empregues, à exceção da CASA. Por fim o cálculo do coeficiente de correlação de Spearman revelou correlações fortes a moderadas entre todos os métodos de avaliação do sémen utilizados, inclusive quando comparadas as determinações subjetivas com a objetiva. Concluindo, todos os resultados indicam que, após o processo de criopreservação do sémen de carneiros Campaniços, a melhor viabilidade espermática é obtida utilizando um período de glicerolização de 4 horas. Constata-se também que, apesar da sua menor precisão, os resultados obtidos subjetivamente (MIP à descongelação, HOST e TTR) são equiparáveis aos objetivos (CASA).

ABSTRACT - Effect of Glycerol Equilibration Time on the Sperm Viability of Thawed Semen from Campaniço Rams - The glycerol equilibration time is a fundamental step in the semen cryopreservation process, allowing the stabilization of the sperm membranes and ensuring glycerol’s effective cryoprotective action. In the present study, semen was collected by electroejaculation from 7 Campaniço rams. 12 semen straws were frozen from these ejaculates, using 1, 2 and 4 hours of glycerol equilibration time. The main objective of this experimental design was to study the effect of different durations of this period on the sperm viability of thawed semen from Campaniço rams. For this, 3 subjective methods of seminal evaluation were used, the microscopic evaluation of Individual Progressive Motility (IPM) at thawing, the Hyposmotic Swelling Test (HOST) and the Thermoresistance Test (TTR). These allowed the assessment of the type of sperm movement, the structural and functional integrity of their cell membranes and their resistance to the environment present in the female genital tract. An objective determination was also performed, using a system of Computer-assisted Semen Analysis (CASA), which provides precise and detailed information about the kinetic profile of each spermatozoon, as well as the distribution of sperm subpopulations in each sample. The results obtained for all tests were superior when using 4 hours of glycerol equilibration time, followed by those corresponding to 2 hours and with the worst values associated with 1 hour duration. By applying a generalized linear mixed model, statistically significant differences were detected between the different glycerol equilibration times, for all the seminal tests employed, with the exception of CASA. Finally, the determination of the Spearman's rank correlation coefficient revealed strong to moderate correlations between all the semen evaluation methods used, including when subjective and objective determinations were compared. In conclusion, all the results indicate that, after the cryopreservation process of semen from Campaniço rams, the best sperm viability is obtained using a 4 hours of glycerol equilibration time. It was also found that, despite their lower precision, the results obtained subjectively (IPM at thawing, HOST and TTR) are comparable to the objective one (CASA).

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