Efeito do processo de sexagem de sêmen por citometria de fluxo e crioprervação sobre a morfometria da cabeça de espermatozóides e estabilidade de cromatina | Effect of the sexed semen process through flow cytometry and cryopreservation on the morphometry of spermatozoid heads and chromatin stability

Bovine sexed semen has been commercially evaluated due to its great economic value for sex selection in milk and beef cattle raising, with purity around 90% for the desired sex. However, its employment depends on the cryopreservation use. The objective of the present study was to analyze the spermatic chromatin stability and morphometric alterations in spermatozoid heads from semen-donor bulls through computerized images obtained from microscopic slides of in natura sexed semen stained with toluidine blue, unfrozen sexed semen and from unfrozen conventional semen. Seventeen ejaculated from 17 bulls were used in the confection the microscopic slides for the morphometric analysis of the spermatic head and 15 ejaculated from 15 bulls were used for the analysis of the spermatic chromatin stability. One hundred digital images were obtained from each slide and were used to segment 100 spermatozoid heads from each slide. Area (A), perimeter (P), width (W), length (L), width/length ratio (W/L), elipcity (E), shape factor (SF), lateral symmetry (LS) and anterior-posterior symmetry (APS) of all heads were determined through the use of softwares developed in the SCILAB. Fourier descriptors with amplitude from 0 to 2 (F0, F1, F2) were also considered for the characterization and analysis of shape, and the spermatic chromatin was evaluated in relation to compaction intensity and homogeneity. Based on results obtained, the dilution, staining and incubation process previous to the separation process through flow cytometry and cryopreservation influenced the morphometry of spermatic cells; however, the chromatic compaction was slightly affected by the sexed process through flow cytometry.

Mestre em Ciências Veterinárias

O sêmen sexado bovino tem sido comercialmente avaliado devido ao grande valor econômico da seleção de sexo na pecuária de leite e de corte com uma pureza em torno 90% para o sexo desejado. Porém para seu uso é indispensável o uso da criopreservação. O presente estudo objetivou analisar a estabilidade da cromatina espermática e alterações morfométricas da cabeça de espermatozóides de touros doadores de sêmen, em imagens computadorizadas obtidas de esfregaços corados com azul de toluidina de sêmen in natura, sexado, sexado descongelado e convencional descongelado. Foram utilizados foram utilizados 17 ejaculados de 17 touros na confecção dos esfregaços para análise de morfometria da cabeça espermática e 15 ejaculados de 15 touros para análise de estabilidade da cromatina espermática, Foram obtidas 100 imagens digitais de cada esfregaço, as quais foram usadas para segmentar 100 cabeças de espermatozóides de cada esfregaço. A área (A), perímetro (P), largura (L), comprimento (C), razão largura: comprimento (L/C), elipcidade (E), fator forma (FF), simetria lateral (SL) e simetria anteroposterior (SAP) de todas as cabeças foram determinadas pelo uso de programas desenvolvidos no SCILAB. Descritores Fourier com amplitude de 0 a 2 (F0, F1, F2) foram também considerados para caracterização e análise da forma, e a cromatina espermática foi avaliada quanto a intensidade de compactação e homogeneidade. Baseado nos resultados obtidos, o processo de diluição, coloração e incubação anterior ao processo de separação por citometria de fluxo e a criopreservação influenciou na morfometria das células espermáticas, porém a compactação da cromatina foi afetada pelo processo de sexagem por citometria de fluxo.