O objetivo do presente estudo foi purificar o hCG contido em uma preparação comercial (Pregnyl® Organon) por cromatografia de afinidade e avaliar a taxa de ovulação de vacas injetadas com o hormônio purificado. Uma coluna de cromatografia contendo matriz de Concanavalina-A Sepharose (Con-A) foi equilibrada e cem mil unidades internacionais (UI) de Pregnyl® foram aplicadas na coluna. Frações de 3,8µL foram colhidas (4ºC) a cada 5 minutos durante 12,5 horas, resultando em um total de 150 frações. Após a fração 76 adicionou-se à coluna solução tampão contendo 0,3M de ±-metilglicosidase. A concentração protéica das frações foi estimada por espectrofotometria (280nm). Foram observados dois picos de absorbância, um entre as frações 14 e 19 e outro entre as frações 90 e 100. As frações 14 a 19 e 90 a 150 foram reunidas seqüencialmente aos pares, concentradas por ultrafiltração e analisadas por SDS-PAGE. O primeiro pico resultou da eluição das proteínas não adsorvidas pela matriz de Con-A, enquanto o segundo representou as proteínas adsorvidas pela coluna, especialmente o hCG. As frações contendo hCG foram reunidas em uma única amostra cuja concentração protéica foi quantificada pelo método de Lowry. Vacas no 5º dia de um ciclo estral sincronizado, apresentando um folículo dominante maior que 8mm de diâmetro, foram injetadas com 0,1, 0,2 ou 0,3mg de proteína contida na amostra purificada. Após 48 horas, a taxa de ovulação observada foi de 0%, 50% e 75%, respectivamente. Foi demonstrado no presente estudo que a técnica de cromatografia por afinidade foi eficiente para aumentar a concentração relativa do hCG preservando sua atividade biológica. | Objective of the present study was to purify hCG contained in commercial preparation (Pregnyl® - Organon) by affinity chromatography and to evaluate ovulation rates in cows injected with the purified hormone. A chromatography column containing concanavalin-A sepharose (Con-A) matrix was equilibrated and one hundred thousand international units (UI) of Pregnyl® were applied to the column. Fractions of 3,8µL were collected (4°C) every 5 minutes for 12,5h, to yield a total of 150 fractions. After fraction 76, a column buffer containing 0,3M ±-methylglicoside was added to the column. Protein concentrations were estimated by espectrophotometry (280nm). Two peaks of absorbance were observed, between fractions 14 and 19, and fractions 90 and 100. Fractions 14-19 and 90-150 were sequentially grouped in pairs concentrated by ultrafiltration and analyzed by SDS-PAGE. The first peak of absorbance resulted from proteins contained in the commercial product, eluted from the column and not adsorbed by the Con-A matrix. The second peak represented proteins adsorbed by the column, especially hCG. The fractions containing hCG were grouped in a single sample and protein concentration was measured by the Lowry method. Cows in day 5 of the estral cycle, which had a dominant follicle larger than 8mm, were injected with 0,1, 0,2 or 0,3mg protein of the purificated sample. The ovulation rate 48 hours after treatment was 0%, 50% and 75%, respectively. It was demonstrated that relative concentration of hCG can be increased by affinity chromatography and biological activity of purified hCG was satisfactory preserved.

A síntese de prostaglandina F2± (PGF2±) endometrial, resulta de uma complexa cascata de eventos intracelulares que ocorrem de maneira altamente coordenada. A síntese de PGF2± pode ser estimulada na presença da melitina e do forbol 12,13 dibutirato (PDBu). O objetivo do presente estudo foi verificar se a produção basal e a estimulação aguda de PGF2± são dependentes da síntese de proteínas. No experimento 1, explantes obtidos de fêmeas bovinas (n=2), cíclicas, não lactantes, no dia 15 do ciclo estral foram incubados em quadruplicata, com meio de cultivo (KHB) ou KHB suplementado com PDBu 10-6M, melitina 10-6M ou melitina 10-5M. Amostras do meio foram coletadas 0 e 60 minutos após os tratamentos e as concentrações de PGF2± foram mensuradas por radioimunoensaio. Com 60 minutos após os tratamentos houve aumento das concentrações médias de PGF2± (P<0,06) em resposta ao tratamento com PDBu comparado ao grupo KHB e melitina. No experimento 2, explantes endometriais de fêmeas bovinas (n=4), não gestantes, no 17° dia do ciclo estral, pesando de 80 a 100mg foram incubados em KHB suplementado com 0, 50, 100 ou 200mg/mL de CHX e 0 ou 100ng/mL de PDBu em um arranjo fatorial 2 x 4, em quadruplicata. Amostras do meio foram coletadas 0 e 60 minutos após os tratamentos e as concentrações de PGF2± foram mensuradas por radioimunoensaio. A integridade dos explantes endometriais tratados com CHX foi avaliada por cortes histológicos. Foi observado aumento na produção de PGF2± em resposta ao tratamento com PDBu (P<0,01), entretanto, não houve diferenças na produção de PGF2± pelos tecidos tratados com diferentes concentrações de CHX, associadas ou não ao PDBu. A integridade histológica dos explantes foi preservada. Conclui-se que a produção basal e a estimulação aguda da síntese de PGF2± não são dependentes da síntese de novas proteínas. | Synthesis of endometrial prostaglandin F2± (PGF2±) results from a complex cascade of highly coordinated intracellular events. Production of PGF2± can be stimulated by mellitin and 12, 13 phorbol dibutyrate (PDBu). Objective of the present study was to verify whether basal or stimulated synthesis of PGF2± was dependent on de novo protein synthesis. In Experiment 1, endometrial explants from cyclic, non-lactating cross-bred beef cows (n=2) on day 15 of the estrous cycle were incubated in quadruplicate in culture KHB culture medium or medium supplemented with 10-6M PDBu, 10-6M melittin or 10-5M melittin. Medium samples were collected immediately and 60 minutes after treatment administration and concentration of PGF2± in medium were measured by radioimmunoassay. Concentrations of PGF2± in medium were higher (P<0.06) after treatment with PDBu in comparison with control and melittin. In Experiment 2, endometrial explants from cyclic, non-lactating cross-bred beef cows (n=4) on day 17 of the estrous cycle were incubated in quadruplicate in medium supplemented with 0, 50, 100 or 200mg cyclohexamide (CHX) and 0 or 100ng/ml PDBu, in a 4 x 2 factorial arrangement. Medium samples were collected immediately and 60 minutes after administration of treatments and concentrations of PGF2± measured by radioimmunoassay. Endometrial integrity was was evaluated by histology. Treatment with PDBu stimulated production of PGF2± (P<0.01), regardless of concentration of CHX used. The CHX did not affect production of PGF2±, either in the presence or absence of PDBu. Histological integrity of explants was preserved. It was concluded that both basal and PDBu-stimulated PGF2± production are not dependent on new protein sythesis.

Os métodos analíticos para quantificar a concentração de lignina atualmente em uso não se tem mostrado satisfatórios. Um método espectrofotométrico, a lignina brometo de acetila (LBA) tem sido empregado para determinar o teor de lignina em plantas forrageiras; entretanto, padece da inexistência de um padrão de referência ideal, com o qual as leituras de densidade óptica das amostras são comparadas. Uma lignina, extraída da planta com solução ácida de dioxano, foi empregada para a construção de uma curva de calibração para o método em questão. Este procedimento foi comparado com outros métodos (lignina detergente ácido - LDA, lignina Klason - LK e lignina permanganato de potássio - LPer) na estimativa do teor de lignina em diferentes frações vegetais (caule, folha e parte aérea) de oito cultivares de aveia (Avena byzantina L.). Não houve concordância de valores entre os quatro métodos analíticos. Num âmbito geral, LBA e LK forneceram as maiores estimativas enquanto a LDA resultou nos menores valores, particularmente nas amostras de plantas mais jovens. A concentração de lignina foi mais elevada na fração caule do que na folha. Foi detectado efeito da maturidade nas amostras analisadas. Conclui-se que o método LBA usando como padrão de referência a lignina extraída com dioxano ácido tem potencial para ser empregado nas determinações dos teores de lignina. | The current analytical methods to quantify lignin in forages are not satisfactory. A spectrophotometric method, the acetyl bromide lignin (ABL), has been employed to determine lignin concentration in forages; however, it suffers from the lack of an ideal standard with which the optical density readings of samples are compared to. A lignin, extracted from the plant with a solution of acidic dioxane, was employed to build a calibration curve for this method. This procedure was then compared with other methods (acid detergent lignin - ADL, Klason lignin - KL and potassium permanganate lignin - PerL) to determine lignin content on different fractions (stem, leaf and whole plant) of eight oat cultivars (Avena byzantina L.). There was no agreement among the four methods. In general, ABL and KL methods yielded the highest values while ADL method yielded the lowest, particularly for the young plants. Lignin concentration was higher in the stem fraction as compared to leaf. It was detected influence of maturity stage in the investigated samples. It is concluded that the ABL method employing as standard lignin extracted with acidic dioxane has potential to be employed as a method to determine lignin concentration.

O presente estudo teve por objetivo avaliar funcionalmente os macrófagos lácteos "nonelicited" presentes por meio de testes de fagocitose, espraiamento e liberação de peróxido de hidrogênio. Foram colhidas 56 amostras de leite de 15 búfalas hígidas e mensuradas a contagem de células somáticas total e diferencial, a viabilidade celular, os testes de fagocitose, de espraiamento e a liberação de peróxido de hidrogênio. Dessas variáveis obteve-se respectivamente média de 14.500 cél/mL de leite; com mediana de 4,33% de linfócitos e médias e desvios padrão de 50,77% + 18,28 de células da série monócito/macrófago e 32,13% + 19,27 de polimorfonucleares. A viabilidade das células na suspensão foi 66,8% +15,8 e os índices de fagocitose e espraiamento foram 30,1% + 16,9 e 58,5% +13,3. Não houve diferença entre a liberação de H2O2 espontânea e induzida por PMA. Concluiu-se que os macrófagos presentes no leite de búfalas hígidas e espraiaram significativamente, além de apresentarem correlação com outro marcador de ativação celular, no caso, a liberação de peróxido de hidrogênio; mais da metade dos macrófagos aderidos fagocitaram partículas de zymosan; os fagócitos mantêm sua capacidade de liberar peróxido de hidrogênio, espontaneamente ou não, em grau máximo, com uma significativa variação entre amostras. | The objective of the present study was to evaluate the functioning of nonelicited dairy macrophages present in phagocytosis, spreading and hydrogen peroxide release tests. Fifty-six samples of milk were collected from 15 healthy buffaloes. Total and differential somatic cell counts, cell viability, and indexes of phagocytosis, spreading and hydrogen peroxide release were assessed. The following values were obtained: mean of 14,500 cells/mL of milk, with median equal to 4.33% of lymphocytes; mean and standard deviation equal to 50.77% + 18.28 of monocytes / macrophages and 32.13% + 19.27 polymorphouclear cells. Mean viability of cells in suspension was 66.8% +15.8; phagocytosis and spreading indexes were equal to 30.1% + 16.9 and 58.5% +13.3, respectively. There was no difference between the spontaneous release of H2O2 and the one induced by PMA. It was concluded that nonelicited macrophages present in the milk of healthy buffaloes were significantly capable to spread and phagocyte. Phagocytes presented the ability to release hydrogen peroxide either spontaneously or not, in a maximum level and with a significant variation between samples.

Na última década, os produtores de leite e carne bovina incrementaram consideravelmente o uso da aspiração folicular (OPU) associada à produção in vitro de embriões (IVP). Oócitos recuperados pela OPU têm qualidade diversificada e seu número reduzido requer condições diferenciadas de cultivo para a IVP. Para determinar o efeito do número de embriões e volume de meio sobre a IVP, 1428 embriões bovinos foram cultivados em grupos de 5, 10 e 20, em 1:1, 1:5 e 1:10mL de meio. Grupos de 20 oócitos foram maturados in vitro em 200mL de TCM-199+ rFSHh+10% de soro de vaca em estro (SVE), por 24h. A fecundação in vitro foi em grupos de 20 oócitos/200mL de meio Fert-Talp, por 18h com 1x10(6) espermatozóides/mL. O cultivo foi em SOFaaci+5% SVE por 8 dias. Considerando-se o dia da fecundação como D0, conduziu-se as avaliações no D2 (clivagem), D7 (blastocistos) e no D9 (eclosão). A taxa de clivagem foi superior quando o cultivo foi com 20 embriões e não foi afetada quando a proporção de meio variou (1:1; 1:5 e 1:10). Com as proporções de meio de cultivo 1:5 ou 1:10, a taxa de embriões em D7 foi superior (P<0.05) à 1:1. O número de embriões cultivados influenciou a produção de blastocistos em D7 (P<0,05) com 20 embriões/gota. Estes resultados também se refletem nos percentuais de blastocistos eclodidos em D9, sendo que 1:5 e 1:10 foram superiores (P<0,05) à 1:1. Da mesma forma, a taxa de eclosão foi superior (P<0,05) com o cultivo de 10 ou 20 embriões/gota quando comparado ao grupo de 5 embriões/gota. A redução do número de embriões e da proporção de volume de meio no cultivo, afeta os índices de desenvolvimento na produção in vitro de embriões bovinos. | In the last decade the dairy and beef bovine farms had an increment in their breeding programs that include the use o ovum pick-up and in vitro production (OPU/IVP). Oocytes retrieved by OPU vary in quality and its reduced number requires appropriated culture conditions for IVP. To evaluate the effect of the number of embryos and volume of the media in the in vitro culture of bovine embryos, 1428 zygotes were cultured in groups of 5, 10 or 20 in 1, 5 or 10mL of medium. Groups of 20 oocytes matured in vitro in 200mL of TCM+rFSHh+ 10% estrus cow serum (ECS). The fertilization was performed in groups of 20 oocytes/200mL of Fert-Talp medium, for 18h with 1x10(6) spermatozoa/mL. The culture was done in SOFaaci+5%ECS for 8 days. Considering D0 as the fertilization day, the IVP was evaluated on day 2 (cleavage), day 7 (blastocyst) and in day 9 (hatching rates). The cleavage rates were higher when embryos were cultured in groups of twenty. However, it was not affected by the medium ratio of 1:1, 1:5 and 1:10. The use of 1:5 and 1:10mL of culture medium ratio showed higher embryo production rates in D7 (P<0.05) than 1:1mL proportion. The culture of 20 embryos per drop affected the blastocyst production on day 7. Likewise the hatching rates in D9 were higher with 1:5 and 1:10 than 1:1. Similarly, the hatching rates were higher in cultured of 10 or 20 embryos/drop when compared to groups of 5 embryos/drop. The reduction of embryos and the proportion of the medium volume in culture affects the development indexes on bovine embryos in vitro production.

Foram realizadas dissecações seriadas desde as raízes nervosas e suas respectivas inervações viscerais, concernentes ao Sistema Nervoso Autônomo, simpático e parassimpático, em cadáveres, a fresco, de cães, sem raça definida, de diferentes tamanhos e pesos, ao longo dos espaços lombossacrais, iniciando-se a dissecação em L1 e finalizando-a em S2. Os aspectos levados em consideração para a análise morfofuncional destas inervações visaram a orientação para o emprego da anestesia local espinhal peridural, tão empregada em anestesiologia veterinária especialmente em se visando pacientes toxêmicos, gestantes ou de alto risco ao se utilizar esta anestesia efetuada por injeção utilizando-se agulha de Twoy, através do espaço lombossacral, manobra esta fácil, mas que conta ainda com certas restrições pela falta de prática. | Serial dissections were accomplished from the nervous roots and their respective visceral innervations, concerning to the Autonomous Nervous System, sympathetic and parasympathetic, in corpses, fresh dog, without defined race, of different sizes and weights, along the lumbossacral spaces, beginning the dissection in L-1 and concluding this, in S-2. The aspects taken into account for the morfofunctional analysis of these innervations to certify the orientation to apply the local spinal peridural anesthesia, that so help in veterinary anesthesiology, especially in toxemic, pregnant or high risk patients, when the use of this anesthesia, made by injection using Twoy needles, through the lumbossacral space, an easy procedure, but there are restrictions still because the lack of practice.

Durante as atividades de extensão rural, desenvolvidas pelo Núcleo de Pesquisa em Mastites - NUPEMAS, do Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista - Botucatu - São Paulo - Brasil, no ano de 2002, foi isolado de uma propriedade leiteira do interior do estado, o fungo Trichosporon beigelii, em quatro animais com mastite clínica, e em três com mastite subclínica. Este fungo é de grande importância, pois é responsável pelo desenvolvimento de quadros de micose superficial, conhecidos como piedra branca. No Brasil, até o presente momento, não há relato de isolamento de Trichosporon beigelii, como agente causador de mastites. Este fato confirma a importância do exame microbiológico para o monitoramento das mastites, pois permite a identificação de patógenos tanto nas infecções intramamárias subclínicas como clínicas, evitando-se o tratamento com antimicrobianos, que nestes casos em particular, além de não exercer seu efeito terapêutico, pode predispor a infecções mistas por outros agentes fúngicos, na medida em que os antimicrobianos fornecem substrato para o desenvolvimento e manutenção destes. | Trichosporon beigelii was isolated from four and three Holstein heifers with clinical and subclinical mastitis respectively, during the extension activities of Nucleus of Mastitis Research - NUPEMAS - FMVZ - UNESP - BOTUCATU - BRAZIL. This fungus is considered extremely important because it is responsible for superficial skin infections, known as "white piedra". According with literature, there is no record of isolation of this agent from mastitis in Brazil. This fact confirms the importance of microbiological studies to lead the treatment correctly to prevent the increase of bacterial resistance and secondary fungal infections that uses the inefficient antimicrobial as substratum for its development.

O Centro de Resgate de Mamíferos Aquáticos (CRMA) tem trabalhado desde 1999 com o resgate e a reabilitação de cetáceos e pinípedes em situação de encalhe no litoral do Estado da Bahia. O presente trabalho objetiva apresentar e avaliar os resultados de hemogramas e dosagens séricas de alanina aminotranferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) e creatinina realizados em um exemplar de elefante-marinho-do-sul, Mirounga leonina (LINNAEUS, 1758), encontrado no dia 11 de fevereiro de 2002 na praia da Barra, litoral de Salvador, BA. Tratava-se de um filhote macho, com 137cm de comprimento e peso aproximado de 49kg, com estado nutricional debilitado, um ferimento no lado direito na altura da escápula. O exemplar permaneceu em acompanhamento clínico por 56 dias, sendo vermifugado com Febendazole, o ferimento suturado e tratado com álcool iodado, Nitrofurazona solução e Tartarato de Ketanserina, simultaneamente com Enrofloxacina 10%, Potenay®, Complexo B e Benerva®. No dia 16 seguinte apresentou um quadro de conjuntivite unilateral direita, sendo tratado até o final de sua estadia com pomada oftálmica à base de Cloridrato de Cloranfenicol. Durante este período colheu-se um total de seis amostras de sangue, sendo três para a realização de hemograma e as demais para dosagem de ALT, AST e creatinina. De acordo com os resultados dos eritrogramas o filhote desenvolveu um quadro de anemia, classificada como microcítica e normocrômica. Com relação aos leucogramas, destacou-se linfopenia, eosinopenia e monocitopenia, possivelmente influenciado pelas condições de estresse e o manejo. Constatou-se nos exames bioquímicos valores diminuídos para a AST e creatinina, porém não representando a existência de um quadro patológico de significância clínica. | Since 1999 the Aquatic Mammals Rescue Center - AMRC has been working in the rescue and rehabilitation of stranded cetaceans and pinnipeds on the coast of Bahia, Brazil. This paper presents and analyses the blood cells count and clinical chemistry of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and creatinine of a southern elephant seal, Mirounga leonina (LINNAEUS, 1758), found on February the 11th at Barra Beach, Salvador, BA. The specimen was an orphan male calf, with 137cm of length and estimated weight of 49kg. It presented bad nutritional conditions and a shark bite on the right shoulder area. Clinical management was performed for 56 days, anthelmintic Febendazole was utilized, and the bite was treated with iodined alcohol, Nitrofurazone solution and Kethanserin, simultaneously with Enrofloxacin 10%, Potenay®, Vitamin B Complex and Benerva®. On the 16th the animal presented a right unilateral conjuntivitis, treated with Cloranphenicol oftalmic pomade until the end of its stay in the captive. During this period a total of six blood samples were collected, three for total blood counts and the others for the biochemistry determination of ALT, AST and creatinine. According to the haematological analysis the seal developed an anaemia which was classified as microcytic and normochromic. Lymphopenia, eosinopenia and monocytopenia were also observed, possibly due to its handling and stress conditions. The clinical chemistry presented low values for AST and creatinine, although this did not represent the existence of any pathologic context or disease with clinical significance.

As doenças prostáticas constituem um problema comum em cães adultos e idosos. Uma das afecções mais freqüentes é a hiperplasia prostática benigna (HPB) que, tanto no cão como no homem, está associada ao avanço da idade e ao desequilíbrio hormonal. No presente trabalho foram mensurados hormônios andrógenos, estrógeno, fosfatase ácida prostática (PAP) e antígeno prostático específico (PSA) de 37 cães com idade superior a três anos, em função do aspecto microscópico da próstata. Encontraram-se baixos níveis de estrógeno e altas concentrações de PSA nos animais com algum tipo de hiperplasia. Os valores de PAP sérico e urinário também foram maiores nos cães com hiperplasia. | Prostatic diseases have been a common problem in middle age and older intact male dogs. Among these, benign prostatic hyperplasia (BHP) is the most frequent, age-related and hormonal-dependent condition of human and canine prostate. Blood samples were collected from 37 male intact dogs, tree years old dogs or more to determine androgens, estrogen, prostatic acid phosphatase (PAP) and prostatic specific antigen (PSA) according to histopathological aspects. Low levels of estrogen and high levels of prostatic specific antigen (PSA) were founded in dogs with BHP, respectively. Seric and urinary PAP levels were high in dogs with hyperplasia.

A mucosa lingual de camundongos jovens foi examinada através de imagens de microscopia eletrônica de transmissão e de varredura de alta resolução. Os espécimes foram fixados em solução modificada de Karnovsky e emblocadas em resina Spurr para a microscopia eletrônica de transmissão. Cortes finos de 80 nm foram feitos e examinados em um microscópio eletrônico de transmissão Jeol 1010. Para a microscopia eletrônica de varredura de alta resolução os espécimes foram imersos na mesma solução, pós fixados em tetróxido de ósmio, secos e cobertos com paládio. As amostras foram examinadas em um microscópio eletrônico de varredura Hitachi S-900. Os resultados revelaram grupos de bactéria aderidos à superfície queratinizada das células epiteliais. Estes estreptococos e cocos aderidos à membrana celular foram notados em imagens tridimensionais. Em aumentos maiores, as imagens de microscopia eletrônica de transmissão demonstraram a adesão de bactéria à membrana celular através de numerosas fimbrias compondo o glicocalice. A estrutura fibrilar emergindo da bactéria foi claramente observada. | Lingual mucosa of young mouse was examined by transmission and high resolution scanning electron microscopic images (HRSEM). The specimens were fixed with modified Karnovsky solution and embedded in Spurr resin for transmission electron microscopy. Thin sections of 80 nm were cut and examined in the Jeol 1010 transmission electron microscope. For HRSEM method, the specimens were fixed in the same solution, postfixed in osmiun tetroxide, critical point dried and coated with palladium. The samples were examined under Hitachi S-900, SEM microscope. The results revealed groups of bacteria attached to the surface of keratinized epithelial cells. These streptococcus and coccus attached on the cell membrane were noted in the three-dimensional SEM images. At high magnification, the transmission electron microscopic images demonstrated the adhesion of bacteria to the cell membrane through numerous fimbria comprising the glycocalyx. The fine fibrillar structure rising from bacteria were clearly seen.