Bovinos taurinos, em clima tropical, mostram menores índices de fertilidade devido ao estresse térmico e oxidativo testicular. Essa alta incidência de alterações espermáticas é potencializada pela grande quantidade de ácidos graxos poli-insaturados (PUFA) presentes nos espermatozoides taurinos. Embora os PUFA aumentem a sensibilidade celular à peroxidação lipídica, são essenciais para a maleabilidade de membrana e promovem maior proteção celular durante a criopreservação. Devido aos relatos de que animais e vegetais de clima frio possuem maior concentração de PUFA nas células, o presente estudo teve como objetivo comparar o efeito da estação do ano sobre a qualidade espermática de taurinos e zebuínos. Foram avaliadas amostras criopreservadas de 10 touros da raça Nelore (Bos taurus indicus) e 10 da raça Simental (Bos taurus taurus), coletadas durante inverno e verão. Após a descongelação, foram realizados testes espermáticos de motilidade e vigor, testes de integridade de membrana plasmática (MPI–Eosina/Nigrosina), integridade acrossomal (MAI-POPE), grau de fragmentação de DNA (DNAf-Ensaio Cometa) e atividade citoquímica mitocondrial (ACM-DAB). Adicionalmente, avaliou-se a suscetibilidade das células espermáticas à peroxidação lipídica induzida, pela mensuração das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e malondialdeído (MDA). No grupo Nelore, foi observada maior motilidade espermática pós-descongelação (26,50% inverno; 13,30% verão) e maior ACM (22,34% inverno; 13,30% verão) durante o inverno. No grupo Simental, não houve diferença de época do ano nas variáveis. Concluiu-se que, apesar de sofrerem maior estresse térmico, nos animais taurinos não foi observado efeito da estação do ano sobre a qualidade espermática, o que pode estar relacionado a uma maior concentração de PUFA em sua composição seminal. | In general, Taurus bulls under tropical conditions demonstrate reduced fertility due to heat and oxidative stress on testicular tissue. This high incidence of sperm damage is generally enhanced by the large amount of polyunsaturated fatty acids (PUFA) naturally present in bull sperm. Despite PUFA increase cellular sensitivity to lipid peroxidation, they are essential for membrane fluidity and also promote high cellular protection during cryopreservation process. Some reports related that animals and plants provided from cold weather present higher cellular concentration of PUFA, so the present study aims to compare the effect of the season on sperm quality of Taurus and Zebu bulls. Cryoprotected semen samples of 10 Nelore (Bos taurus indicus) and 10 Simmental (Bos taurus taurus) bulls were analyzed during winter and summer seasons. After freezing-thawing process, semen samples were submitted to sperm motility and vigor analysis, to tests of plasma membrane integrity (MPI–Eosin/Nigrosin), acrosomal integrity (MAI-POPE), DNA fragmentation degree (DNAf-Comet Assay) and high mitochondrial activity (ACM-DAB). Moreover, frozen-thawed semen samples were induced to lipid peroxidation for measurement of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and malondialdehyde (MDA) concentration. Higher post-thawing sperm motility (26.50% winter; 13.30% summer) and ACM (22.34% winter; 13.30% summer) were observed during the winter in Nelore group. In Simmental group, no differences were observed for the studied variables. It was concluded that, despite the heat stress, no seasonal effect on sperm quality was observed in Taurus cattle, which may be related to higher concentration of PUFA in seminal composition.

Bovinos taurinos, em clima tropical, mostram menores índices de fertilidade devido ao estresse térmico e oxidativo testicular. Essa alta incidência de alterações espermáticas é potencializada pela grande quantidade de ácidos graxos poli-insaturados (PUFA) presentes nos espermatozoides taurinos. Embora os PUFA aumentem a sensibilidade celular à peroxidação lipídica, são essenciais para a maleabilidade de membrana e promovem maior proteção celular durante a criopreservação. Devido aos relatos de que animais e vegetais de clima frio possuem maior concentração de PUFA nas células, o presente estudo teve como objetivo comparar o efeito da estação do ano sobre a qualidade espermática de taurinos e zebuínos. Foram avaliadas amostras criopreservadas de 10 touros da raça Nelore (Bos taurus indicus) e 10 da raça Simental (Bos taurus taurus), coletadas durante inverno e verão. Após a descongelação, foram realizados testes espermáticos de motilidade e vigor, testes de integridade de membrana plasmática (MPI–Eosina/Nigrosina), integridade acrossomal (MAI-POPE), grau de fragmentação de DNA (DNAf-Ensaio Cometa) e atividade citoquímica mitocondrial (ACM-DAB). Adicionalmente, avaliou-se a suscetibilidade das células espermáticas à peroxidação lipídica induzida, pela mensuração das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e malondialdeído (MDA). No grupo Nelore, foi observada maior motilidade espermática pós-descongelação (26,50% inverno; 13,30% verão) e maior ACM (22,34% inverno; 13,30% verão) durante o inverno. No grupo Simental, não houve diferença de época do ano nas variáveis. Concluiu-se que, apesar de sofrerem maior estresse térmico, nos animais taurinos não foi observado efeito da estação do ano sobre a qualidade espermática, o que pode estar relacionado a uma maior concentração de PUFA em sua composição seminal.

Mudanças ambientais afetam a homeostase dos peixes, tornando-os mais suscetíveis a doenças. No Brasil, tem sido relatados surtos de infecção por Streptococcus agalactiae em tilápia do Nilo, principalmente quando se encontram fora da zona de conforto térmico. No presente trabalho, foi avaliada a taxa de mortalidade e determinado quais foram os órgãos mais afetados por essa bactéria em temperaturas que ocorrem naturalmente no Sul do Brasil. Quarenta tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus) foram infectadas por Streptococcus agalactiae e distribuídas em quatro grupos (n = 10), cada um deles submetidos a diferentes temperaturas: G1: 24°C, G2: 26°C, G3: 28°C e G4: 32°C. Os peixes foram monitorados durante 10 dias. Os peixes com sinais clínicos irreversíveis foram sacrificados e coletadas amostras de cérebro, fígado e rins para analise bacteriológica e molecular. Foram observados sinais compatíveis com infecção estreptocócica em todos os grupos. A taxa de mortalidade mais elevada ocorreu nos grupos mantidos nas temperaturas de 24°C e 32°C. O cérebro foi o órgão mais afetado, com a maior percentagem de isolamento de S. agalactiae pelos dois métodos de diagnostico. Os resultados sugerem que, tal como nos mamíferos, temperaturas que estão mais afastadas da zona de conforto afetam significativamente a homeostase dos peixes, aumentando a sua susceptibilidade para infecções bacterianas. | Environmental changes affect fish homeostasis, turning them more susceptible to diseases. In Brazil, outbreaks of Streptococcus agalactiae infection have been reported in Nile tilapia when they are outside of their thermal comfort zone. This investigation evaluated mortality rate and which were the most infected organs at temperatures that naturally occurred in southern of Brazil. Forty Nile tilapia (Oreochromis niloticus) were infected with S. agalactiae and distributed in four groups (n=10) and each group was exposed to a different temperature: G1: 24°C, G2: 26°C, G3: 28°C, and G4: 32°C. Fish were monitored for 10 days. In this period, fish that presented irreversible clinical signs were sacrificed and samples of brain, liver, and kidney were collected for bacteriological and molecular analysis. Signs compatible with a streptococcal infection were observed in all groups. Highest mortality rates occurred at 24°C and 32°C. The brain was the most affected organ with the highest percentage of isolation of S. agalactiae by both methods of diagnosis. The results suggest that, as in mammals, temperatures that are further away from the comfort zone influence fish homeostasis, increasing susceptibility to bacterial infections.

Environmental changes affect fish homeostasis, turning them more susceptible to diseases. In Brazil, outbreaks of Streptococcus agalactiae infection have been reported in Nile tilapia when they are outside of their thermal comfort zone. This investigation evaluated mortality rate and which were the most infected organs at temperatures that naturally occurred in southern of Brazil. Forty Nile tilapia (Oreochromis niloticus) were infected with S. agalactiae and distributed in four groups (n=10) and each group was exposed to a different temperature: G1: 24°C, G2: 26°C, G3: 28°C, and G4: 32°C. Fish were monitored for 10 days. In this period, fish that presented irreversible clinical signs were sacrificed and samples of brain, liver, and kidney were collected for bacteriological and molecular analysis. Signs compatible with a streptococcal infection were observed in all groups. Highest mortality rates occurred at 24°C and 32°C. The brain was the most affected organ with the highest percentage of isolation of S. agalactiae by both methods of diagnosis. The results suggest that, as in mammals, temperatures that are further away from the comfort zone influence fish homeostasis, increasing susceptibility to bacterial infections.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a reatividade de equinos durante o manejo habitual de escovação, frente à exposição repetida a um estímulo sonoro desconhecido. Para isto, foram utilizados 20 equinos da raça Mangalarga Marchador, de diferentes categorias (éguas e potros), os quais foram alocados aos tratamentos: controle (N = 10) e com estímulo sonoro desconhecido (N = 10), que consistia em confrontar os animais com o estímulo sonoro de um chocalho e um tamborim. Primeiramente, foram realizadas quatro avaliações consecutivas (dia 0, 1, 2, 3). Após 30 dias da primeira coleta, foram realizadas duas avaliações consecutivas (dia 30 e 31), e passados 15 dias desta, foram realizadas mais duas avaliações consecutivas (dia 45 e 46). As observações comportamentais foram feitas por meio da atribuição de escores aos comportamentos de movimentação, posição das orelhas e dos olhos, respiração e vocalização durante o manejo de escovação. Também foi conferida a variável resposta de reatividade com valores variando de 1 a 4 (animal não reativo ou calmo a animal muito reativo ou agressivo). Foi ajustado o modelo de regressão logística ordinal usando como covariáveis as categorias, dia e tratamento. A reatividade dos animais com estímulo sonoro desconhecido foi maior. Os dias do período experimental influenciaram a reatividade dos animais entre 6 e 7 meses de idade, com diminuição das chances dos animais desta idade apresentarem maior reatividade no decorrer dos dias. O amadurecimento do potro junto com a exposição repetida ao estímulo sonoro desconhecido podem diminuir a possibilidade de o animal ser reativo. | The study aimed to evaluate reactivity of horses during usual brushing management against the repeated presence of an unknown sonorous stimulus. Twenty Mangalarga Marchador horses, distributed in different categories (mares and foals), were evaluated. The animals were allocated into the control treatment (N = 10) and the treatment with unknown sonorous stimulus (N = 10) from a rattle and a tambourine. Four consecutive evaluations were carried out first (day 0, 1, 2, 3). Two consecutive assessments were carried out after 30 days of the first collection (day 30 and 31), and two consecutive assessments were carried out 15 days after the second evaluation (day 45 and 46). The behavioral observations were made by assigning a score to behaviors of movement, position of ears and eyes, breathing, and vocalization during brushing management. A response variable called reactivity was attributed to each animal, ranging from score 1 (not reactive or calm animal) to reactivity score 4 (very reactive or aggressive animal). For statistical analysis, the results were adjusted to a logistic regression model using the categories, day, and treatment as covariates. The animals of the unknown stimuli showed greater reactivity. The days of the experimental period influenced the reactivity of animals between 6 and 7 months old, with a decrease in the possibilities of the animals to have a higher reactivity. The maturity of the foal with repeated exposure to the unknown sound stimulus may decrease the possibility of the animal being reactive.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a reatividade de equinos durante o manejo habitual de escovação, frente à exposição repetida a um estímulo sonoro desconhecido. Para isto, foram utilizados 20 equinos da raça Mangalarga Marchador, de diferentes categorias (éguas e potros), os quais foram alocados aos tratamentos: controle (N = 10) e com estímulo sonoro desconhecido (N = 10), que consistia em confrontar os animais com o estímulo sonoro de um chocalho e um tamborim. Primeiramente, foram realizadas quatro avaliações consecutivas (dia 0, 1, 2, 3). Após 30 dias da primeira coleta, foram realizadas duas avaliações consecutivas (dia 30 e 31), e passados 15 dias desta, foram realizadas mais duas avaliações consecutivas (dia 45 e 46). As observações comportamentais foram feitas por meio da atribuição de escores aos comportamentos de movimentação, posição das orelhas e dos olhos, respiração e vocalização durante o manejo de escovação. Também foi conferida a variável resposta de reatividade com valores variando de 1 a 4 (animal não reativo ou calmo a animal muito reativo ou agressivo). Foi ajustado o modelo de regressão logística ordinal usando como covariáveis as categorias, dia e tratamento. A reatividade dos animais com estímulo sonoro desconhecido foi maior. Os dias do período experimental influenciaram a reatividade dos animais entre 6 e 7 meses de idade, com diminuição das chances dos animais desta idade apresentarem maior reatividade no decorrer dos dias. O amadurecimento do potro junto com a exposição repetida ao estímulo sonoro desconhecido podem diminuir a possibilidade de o animal ser reativo.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a reatividade de equinos durante o manejo habitual de escovação, frente à exposição repetida a um estímulo sonoro desconhecido. Para isto, foram utilizados 20 equinos da raça Mangalarga Marchador, de diferentes categorias (éguas e potros), os quais foram alocados aos tratamentos: controle (N = 10) e com estímulo sonoro desconhecido (N = 10), que consistia em confrontar os animais com o estímulo sonoro de um chocalho e um tamborim. Primeiramente, foram realizadas quatro avaliações consecutivas (dia 0, 1, 2, 3). Após 30 dias da primeira coleta, foram realizadas duas avaliações consecutivas (dia 30 e 31), e passados 15 dias desta, foram realizadas mais duas avaliações consecutivas (dia 45 e 46). As observações comportamentais foram feitas por meio da atribuição de escores aos comportamentos de movimentação, posição das orelhas e dos olhos, respiração e vocalização durante o manejo de escovação. Também foi conferida a variável resposta de reatividade com valores variando de 1 a 4 (animal não reativo ou calmo a animal muito reativo ou agressivo). Foi ajustado o modelo de regressão logística ordinal usando como covariáveis as categorias, dia e tratamento. A reatividade dos animais com estímulo sonoro desconhecido foi maior. Os dias do período experimental influenciaram a reatividade dos animais entre 6 e 7 meses de idade, com diminuição das chances dos animais desta idade apresentarem maior reatividade no decorrer dos dias. O amadurecimento do potro junto com a exposição repetida ao estímulo sonoro desconhecido podem diminuir a possibilidade de o animal ser reativo.

Apesar da manipulação genética de animais domésticos ser de grande interesse para a produção animal e para a indústria farmacêutica, a sua eficiência ainda é insatisfatória. A injeção pronuclear, a técnica mais utilizada para tal proposito, principalmente em camundongos, ainda apresenta limitações para esta espécie. Algumas alternativas têm sido desenvolvidas como o uso de espermatozoides como vetores para transferência genica, na qual a célula espermática tem habilidade espontânea de se ligar a molécula de DNA e internaliza-la. Dado o potencial da transferência genica mediada por espermatozoide para animais domésticos transgênicos, o objetivo do presente trabalho foi a avaliação de quatro métodos de incorporação de DNA para a transferência genica mediada por espermatozoides na espécie bovina: incubação com DNA, alteração da membrana plasmática induzida por cálcio ionóforo seguida por incubação com o DNA exógeno, eletroporação e lipofecção. Espermatozoides não expostos ao DNA exógeno foram usados como grupo controle. Os índices de clivagem, blastocisto e eclosão foram avaliados, respectivamente, as 72 horas após a inseminação dos oócitos, bem como, aos 9 e 12 dias de cultivo embrionário. Os embriões positivos para o DNA exógeno foram avaliados por PCR. Nenhum efeito de tratamento foi observado nos índices de clivagem, blastocisto e eclosão. Além disso, a porcentagem de blastocistos positivos para o DNA exógeno não diferiu entre os grupos experimentais. Apesar do baixo número de embriões positivos para DNA exógeno, os resultados obtidos mostram que todos os tratamentos apresentaram eficiências similares. A conclusão obtida foi que, apesar de os índices de desenvolvimento embrionário terem sido similares e constante em todos os grupos experimentais, outros fatores como a sequência, o tamanho e a concentração do DNA exógeno devem ser avaliados para melhorar a transferência genica mediada por espermatozoides. | Although genetic manipulation of farm animals is of great interest for animal production and the pharmaceutical industry, its efficiency remains far from satisfactory. Pronuclear injection, which is the most widely used technique for such modification, mainly in mice, remains limited for this species. Some alternatives have been developed such as sperm mediated gene transfer, in which the spermatozoa are used as vectors for DNA delivery during in vitro fertilization. Mature sperm cells are able to spontaneously bind exogenous DNA molecules which may be internalized into sperm nuclei. Given the potential of sperm mediated gene transfer for livestock animals transgenesis, the aim of this study was to evaluate four methods of DNA uptake for sperm mediated gene transfer in bovine: incubation with DNA, plasma membrane alteration induced by calcium ionophore followed by incubation with DNA, electroporation and lipofection. Spermatozoa not exposed to exogenous DNA were used as control group. Cleavage, blastocyst and hatching rates were recorded at 72 hours post insemination (hpi), days 9 and 12 of embryo culture, respectively. Exogenous DNA-positive embryos were evaluated by PCR. No effect of treatment was observed on cleavage, blastocyst and hatching rates. In addition, percentage of DNA positive blastocysts did not differ among experimental groups. In spite of the low number of positive embryos, our results show that all treatments presented similar efficiencies for DNA delivery during in vitro fertilization. In conclusion, although the development rates were similar and constant in all groups, other factors such as exogenous DNA sequence, size and concentration should be considered to improve sperm mediated gene transfer.

Although genetic manipulation of farm animals is of great interest for animal production and the pharmaceutical industry, its efficiency remains far from satisfactory. Pronuclear injection, which is the most widely used technique for such modification, mainly in mice, remains limited for this species. Some alternatives have been developed such as sperm mediated gene transfer, in which the spermatozoa are used as vectors for DNA delivery during in vitro fertilization. Mature sperm cells are able to spontaneously bind exogenous DNA molecules which may be internalized into sperm nuclei. Given the potential of sperm mediated gene transfer for livestock animals transgenesis, the aim of this study was to evaluate four methods of DNA uptake for sperm mediated gene transfer in bovine: incubation with DNA, plasma membrane alteration induced by calcium ionophore followed by incubation with DNA, electroporation and lipofection. Spermatozoa not exposed to exogenous DNA were used as control group. Cleavage, blastocyst and hatching rates were recorded at 72 hours post insemination (hpi), days 9 and 12 of embryo culture, respectively. Exogenous DNA-positive embryos were evaluated by PCR. No effect of treatment was observed on cleavage, blastocyst and hatching rates. In addition, percentage of DNA positive blastocysts did not differ among experimental groups. In spite of the low number of positive embryos, our results show that all treatments presented similar efficiencies for DNA delivery during in vitro fertilization. In conclusion, although the development rates were similar and constant in all groups, other factors such as exogenous DNA sequence, size and concentration should be considered to improve sperm mediated gene transfer.

A expressão do antígeno núcleo celular proliferante (ANCP) foi avaliada no endométrio de éguas durante o estro e início do diestro. Em cada uma de dez éguas foram efetuadas biópsias do endométrio em três momentos dos respectivos ciclos reprodutivos: segundo dia do estro, dia da ovulação e sete dias após a ovulação. Nas amostras colhidas no segundo dia do estro e no dia da ovulação, a expressão do ANCP foi elevada no epitélio luminal e baixa nas glândulas endometriais (p < 0,05). Nas amostras colhidas no sétimo dia após a ovulação, a média de ANCP imunologicamente corado foi maior no epitélio glandular (p < 0,05). O estudo revelou que as células do epitélio luminal apresentaram a maior proliferação durante o estro e que as células epiteliais glandulares apresentaram a maior proliferação durante o diestro. | Immunohistochemical expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was evaluated in the endometrium of mares during estrus and at early diestrus. Three samples were collected by endometrial biopsy from 10 mares, on estrus/ second day, in the ovulation day and seven days after the ovulation day. PCNA expression was high in luminal epithelium and low in endometrial glands on samples taken on estrus/second day and on the ovulation day (p < 0.05). For samples collected on the seventh day following ovulation, the averaged PCNA immunostaining was higher in glandular epithelium (p < 0.05). The study revealed that luminal epithelial cells exhibit higher proliferation during estrus and glandular epithelial cells exhibited higher proliferation during diestrus.

Immunohistochemical expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was evaluated in the endometrium of mares during estrus and at early diestrus. Three samples were collected by endometrial biopsy from 10 mares, on estrus/ second day, in the ovulation day and seven days after the ovulation day. PCNA expression was high in luminal epithelium and low in endometrial glands on samples taken on estrus/second day and on the ovulation day (p < 0.05). For samples collected on the seventh day following ovulation, the averaged PCNA immunostaining was higher in glandular epithelium (p < 0.05). The study revealed that luminal epithelial cells exhibit higher proliferation during estrus and glandular epithelial cells exhibited higher proliferation during diestrus.

Foi avaliada a influencia do ciclo estral e temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos. As cadelas foram categorizadas em dois grupos baseados no estagio do ciclo estral – anestro ou diestro. Um ovário por par coletado foi transportado em solução fisiológica 0,9% a 4°C enquanto o outro foi transportado a 37°C. Então, os ovários foram seccionados em PBS para a liberação dos complexos cumulus oocito (COCs). Um total de 345 COCs (n = 186 oocitos obtidos de cadelas em anestro e 159 em diestro) foi cultivado em TCM 199 suplementado com HEPES, piruvato de sódio, cisteina, hormônio folículo estimulante (FSH), gonadotrofina coriônica humana (hCG), estrógeno (E2) e fator de crescimento epidermal (EGF). Apos 72h de maturação, os COCs foram desnudados, fixados e corados para avaliação da maturação nuclear. O teste de Fisher foi utilizado para avaliar as diferenças entre os grupos. O nível de significância adotado foi de 0,05. Os oócitos obtidos de cadelas em diestro transportados a 4°C apresentaram maior frequência de oócitos no estagio de metáfase II (21,1%) que os mantidos na temperatura de 37°C (p &lt; 0,01). De forma similar, houve maior frequência de oócitos nos estágios de metáfase II (11,2%) nos ovários obtidos de cadelas em anestro e transportados a 4°C que nos ovários mantidos a 37°C (p &lt; 0,05). Concluiu-se que a temperatura de transporte influencia os resultados de viabilidade oocitária canina e a maturação in vitro, independentemente do estagio reprodutivo da fêmea. | This study evaluated the influence of estrous cycle stage and transport temperature of ovaries on in vitro maturation of canine oocytes. The bitches were categorized into two groups based on stage of estrus cycle: diestrus or anestrus. One ovary of each pair collected was transported in saline solution at 4°C while the other was transported at 37°C. Thus, ovarian tissue was sliced in PBS to release cumulus oocyte complexes (COCs). A total of 345 COCs (n = 186 oocytes from ovaries of bitches in anestrus and 159 in diestrus) were cultivated in TCM 199 supplemented with HEPES, sodium pyruvate, cysteine, follicle stimulating hormone (FSH), human chorionic gonadotropin (hCG), estrogen (E2) and epidermal growth factor (EGF). After 72h of maturation, the COCs were denuded, fixed and stained to assess nuclear maturation. The Fisher test was applied to examine the differences between the groups. The significance level adopted was 0.05. The oocytes obtained from the ovaries from bitches in diestrus transported at 4°C shown increased frequency of oocytes in metaphase II stage than those maintained at 37°C (p &lt; 0.01). Similarly, there was increased frequency of oocytes in metaphase II (11.1%) stage from the ovaries of bitches in anestrus and transported at 4°C, than those maintained at 37°C (p &lt; 0.05). It was concluded that transport temperature influences the results of canine oocyte viability and in vitro maturation, regardless of reproductive stage of the female.

Foi avaliada a influencia do ciclo estral e temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos. As cadelas foram categorizadas em dois grupos baseados no estagio do ciclo estral – anestro ou diestro. Um ovário por par coletado foi transportado em solução fisiológica 0,9% a 4°C enquanto o outro foi transportado a 37°C. Então, os ovários foram seccionados em PBS para a liberação dos complexos cumulus oocito (COCs). Um total de 345 COCs (n = 186 oocitos obtidos de cadelas em anestro e 159 em diestro) foi cultivado em TCM 199 suplementado com HEPES, piruvato de sódio, cisteina, hormônio folículo estimulante (FSH), gonadotrofina coriônica humana (hCG), estrógeno (E2) e fator de crescimento epidermal (EGF). Apos 72h de maturação, os COCs foram desnudados, fixados e corados para avaliação da maturação nuclear. O teste de Fisher foi utilizado para avaliar as diferenças entre os grupos. O nível de significância adotado foi de 0,05. Os oócitos obtidos de cadelas em diestro transportados a 4°C apresentaram maior frequência de oócitos no estagio de metáfase II (21,1%) que os mantidos na temperatura de 37°C (p < 0,01). De forma similar, houve maior frequência de oócitos nos estágios de metáfase II (11,2%) nos ovários obtidos de cadelas em anestro e transportados a 4°C que nos ovários mantidos a 37°C (p < 0,05). Concluiu-se que a temperatura de transporte influencia os resultados de viabilidade oocitária canina e a maturação in vitro, independentemente do estagio reprodutivo da fêmea.

The diagnostic value of RT-PCR and hemi-nested RT-PCR (hnRT-PCR) was compared in brain samples of dogs presenting neurological signs compatible with canine distemper. Samples of central nervous system (CNS) were collected from 68 dogs and tested by direct immunofluorescence test (RFID) and, independent of the results, they were stored at -20°C for at least three years. They were submitted to the RT-PCR and hnRT-PCR techniques aiming to determine the gene responsible for the viral nucleoprotein decoding. Fifty-nine samples were positive for RIFD, 40 for RT-PCR (Kappa = 0.358) and 54 for hnRT-PCR (Kappa = 0.740). All nine RIFD negative samples were also negative for RT-PCR and hnRT-PCR. In spite of the storage duration and proper sample conditions, the estimated accordance between hnRT-PCR and RIFD demonstrated that hnRT-PCR technique can be applied in retrospective studies. | Foi comparado o valor diagnóstico das técnicas de RT-PCR e heminested RT-PCR (hnRT-PCR) em amostras de cérebro de cães com sintomatologia nervosa compatível com cinomose. Fragmentos do sistema nervoso central (SNC) colhidos de 68 animais foram testados pela Imunofluorescência direta (IFD) e, independentemente do resultado, foram armazenados a -20°C por pelo menos três anos. Após esse período, foram submetidos a RT-PCR e a hnRT-PCR com oligonucleotídeos iniciadores direcionados ao gene codificador da nucleoproteína N. As proporções de resultados positivos/examinados foram: 59/68 para a IFD, 40/68 para a RT-PCR (Kappa = 0,358) e 54/68 quando associada à heminested PCR (Kappa = 0,740). Houve nove resultados negativos nas três técnicas empregadas. Os resultados do coeficiente Kappa entre a IFD e hnRT-PCR demonstram que apesar das condições de armazenamento, a hnRT-PCR pode ser utilizada em estudos retrospectivos.

The diagnostic value of RT-PCR and hemi-nested RT-PCR (hnRT-PCR) was compared in brain samples of dogs presenting neurological signs compatible with canine distemper. Samples of central nervous system (CNS) were collected from 68 dogs and tested by direct immunofluorescence test (RFID) and, independent of the results, they were stored at -20°C for at least three years. They were submitted to the RT-PCR and hnRT-PCR techniques aiming to determine the gene responsible for the viral nucleoprotein decoding. Fifty-nine samples were positive for RIFD, 40 for RT-PCR (Kappa = 0.358) and 54 for hnRT-PCR (Kappa = 0.740). All nine RIFD negative samples were also negative for RT-PCR and hnRT-PCR. In spite of the storage duration and proper sample conditions, the estimated accordance between hnRT-PCR and RIFD demonstrated that hnRT-PCR technique can be applied in retrospective studies.

Foi avaliada a frequência de infestação por larvas de Dermatobia hominis em bovinos leiteiros, investigando-se a existência de correlação entre a incidência do berne e os fatores climáticos (temperatura, umidade relativa e precipitação pluviométrica) com a sua distribuição na superfície corporal dos animais. Foram selecionadas duas áreas localizadas na região Sudeste do Brasil: Área 1: clima subtropical/tropical de altitude (Cwa); Área 2: clima tropical (Aw). As observações foram realizadas no período de maio a dezembro de 2013. Em cada propriedade foram examinados dez animais em coletas de campo quinzenais para o levantamento do número de nódulos de berne. Foram registrados nódulos durante todos os meses de coleta. A Área 1 apresentou média de 12,94 bernes/mês, e a Área 2, 7,58 bernes/mês. Na Área 2, não foi constatada a existência de correlação entre o número de bernes e as variáveis climáticas (p &gt; 0,05). Na Área 1, houve correlação entre o número médio de bernes com a temperatura (p = 0,011) e a precipitação (p = 0,034). Esses fatores climáticos, relacionados às características edáficas, influenciam a penetração das larvas L3 e o período pupal. O maior número de nódulos foi encontrado na região anterior inferior, seguida pela região anterior superior do corpo dos animais, regiões nobres que compõe a parte industrializável da pele do animal e que representam a maior causa de prejuízo econômico. | Dermatobia hominis infestation in dairy cattle was investigated, searching for the existence of correlations between the incidence of botfly and climatic factors (temperature, relative humidity, and rainfall) and its distribution on the animal body surface. Two geographical areas located in the southeast region of Brazil were selected. Area 1- tropical and sub-tropical climate of altitude (Cwa); Area-2 tropical climate (Aw). During the period from May to December 2013, 10 animals were selected in each area and biweekly field collections were carried out for quantification of the average number of larvae in the herd. Larval nodes were registered during every month of the survey. Area 1 had an average of 12.94 larvae/month and Area 2 an average of -7.58 larvae/month. No correlation between the number of larvae and the climatic variables (p &gt; 0.05) was found in Area 2. A positive correlation between the average number of larvae and the temperature (p = 0.011) and precipitation (p = 0.034) was found in Area 1. These climatic factors are related to soil characteristics, influencing the penetration of L3 larvae and the pupal period. The greatest number of nodules was found in the anterior inferior region, followed by the anterior superior region of the animal body. The infestation in these regions deserves a special emphasis because these are the regions comprising the part of the animals’ hides which can be industrialized, and thus represent the largest cause of economic losses.

Foi avaliada a frequência de infestação por larvas de Dermatobia hominis em bovinos leiteiros, investigando-se a existência de correlação entre a incidência do berne e os fatores climáticos (temperatura, umidade relativa e precipitação pluviométrica) com a sua distribuição na superfície corporal dos animais. Foram selecionadas duas áreas localizadas na região Sudeste do Brasil: Área 1: clima subtropical/tropical de altitude (Cwa); Área 2: clima tropical (Aw). As observações foram realizadas no período de maio a dezembro de 2013. Em cada propriedade foram examinados dez animais em coletas de campo quinzenais para o levantamento do número de nódulos de berne. Foram registrados nódulos durante todos os meses de coleta. A Área 1 apresentou média de 12,94 bernes/mês, e a Área 2, 7,58 bernes/mês. Na Área 2, não foi constatada a existência de correlação entre o número de bernes e as variáveis climáticas (p > 0,05). Na Área 1, houve correlação entre o número médio de bernes com a temperatura (p = 0,011) e a precipitação (p = 0,034). Esses fatores climáticos, relacionados às características edáficas, influenciam a penetração das larvas L3 e o período pupal. O maior número de nódulos foi encontrado na região anterior inferior, seguida pela região anterior superior do corpo dos animais, regiões nobres que compõe a parte industrializável da pele do animal e que representam a maior causa de prejuízo econômico.

As diferenças moleculares entre as estirpes de Mycoplasma hyopneumoniae presentes em pulmões de suínos com pneumonia tem sido estudadas. Porém, estudos comparativos relativos as estirpes presentes nos suínos aparentemente saudáveis não foram levados a cabo. O objetivo do estudo foi a detecção, quantificação e analise molecular de M. hyopneumoniae nos pulmões suínos com e sem lesões pneumônicas. Para a detecção de M. hyopneumoniae usaramse o PCR Multiplo (YAMAGUTI, 2008), o PCR a Tempo Real (STRAIT et al., 2008) e a amplificação de múltiplo VNTR (VRANCKX et al., 2011). A caracterização molecular das estirpes foi realizada mediante a análise do número de copias de VNTR em P97R1, P146R3, H2R1 e H4. O M. hyopneumoniae foi detectado em amostras de suínos saudáveis e pneumônicos e a quantidade de M. hyopneumoniae nas amostras positivas variou com o tipo de ensaio. O maior número de amostras positivas foi identificado pela amplificação de múltiplas VNTR combinado com a eletroforese de capilares. Usando o PCR a Tempo Real, 4.9*104 copias de genoma/mL de M. hyopneumoniae foram detectadas em pulmões aparentemente saudáveis. Uma quantidade média de 3.9*106 copias de genoma/mL de M. hyopneumoniae foi detectada em pulmões pneumônicos. A análise do número de copias de VNTR demonstrou uma elevada variabilidade. | Mycoplasma hyopneumoniae is the causative agent of the Porcine Enzootic Pneumonia. However, this mycoplasma can be detected in healthy and symptomatic pigs, that difficults the conclusion for the etiology of this disease. In the present study we aimed to detect, quantify and do molecular analyses of M. hyopneumoniae strains in respiratory clinical samples recovered from healthy pigs and from those with pneumonia or other respiratory symptoms. The analytical sensitivity and specificity of PCR assays directed to Mollicutes detection and porcine mycoplasmas identification in clinical samples were evaluated. The identification of M. hyopneumoniae in the samples was performed using different molecular approaches, Multiplex PCR, Real Time PCR and Multilocus Variable-Number Tandem-Repeat amplification. Molecular characterization of the strains was achieved by determining and comparing the VNTR copy number directly in the samples. The highest number of samples positive to M. hyopneumoniae was identified by the multilocus VNTR amplification assay using labeled primers, followed by capillary electrophoresis. The highest concentration of M. hyopneumoniae was detected in pneumonic lungs (2, 3 * 108 genome copies /mL). The VNTR copy number analysis demonstrated that despite the high genetic variability of the M. hyopneumoniae strains, predominant strains in the swine farms could be identified by means of the VNTR copy number analysis of P97R1 and P146R3. (English) | Molecular differences among Mycoplasma hyopneumoniae strains present in pneumonic lungs of swine have been largely studied. However, no comparative studies concerning the strains present in apparently healthy pigs have been carried out. This study aimed to detect, quantify and perform molecular analysis of M. hyopneumoniae strains in pig lungs with and without pneumonic lesions. The detection of M. hyopneumoniae was performed using multiplex PCR (YAMAGUTI, 2008), real-time PCR (STRAIT et al., 2008) and multiple VNTR amplification (VRANCKX et al., 2011). Molecular characterization of the strains was achieved by analysis of the VNTR copy number in P97R1, P146R3, H2R1 and H4. M. hyopneumoniae was detected in samples from healthy and pneumonic pigs and the amount of M. hyopneumoniae positive samples detected varied with the type of assay. The greater number of positive samples was identified by the multiple VNTR amplification combined with capillary electrophoresis. Using real-time PCR, 4.9*104 M. hyopneumoniae genome copies/mL was detected in apparently healthy lungs. A mean quantity of 3.9*106 M. hyopneumoniae genome copies/mL was detected in pneumonic lungs. The analysis of VNTR copy number demonstrated a high genetic variability of the M. hyopneumoniae strains present in apparently healthy and pneumonic lungs. Strains having 3 VNTR copy number in P97R1, were detected only in pneumonic lungs and strains having 40 and 43 VNTR copy number in P146R3 were detected only in apparently healthy lungs. Despite the genetic variability of M. hyopneumoniae, predominant strains in the swine farms could be identified.

Molecular differences among Mycoplasma hyopneumoniae strains present in pneumonic lungs of swine have been largely studied. However, no comparative studies concerning the strains present in apparently healthy pigs have been carried out. This study aimed to detect, quantify and perform molecular analysis of M. hyopneumoniae strains in pig lungs with and without pneumonic lesions. The detection of M. hyopneumoniae was performed using multiplex PCR (YAMAGUTI, 2008), real-time PCR (STRAIT et al., 2008) and multiple VNTR amplification (VRANCKX et al., 2011). Molecular characterization of the strains was achieved by analysis of the VNTR copy number in P97R1, P146R3, H2R1 and H4. M. hyopneumoniae was detected in samples from healthy and pneumonic pigs and the amount of M. hyopneumoniae positive samples detected varied with the type of assay. The greater number of positive samples was identified by the multiple VNTR amplification combined with capillary electrophoresis. Using real-time PCR, 4.9*104 M. hyopneumoniae genome copies/mL was detected in apparently healthy lungs. A mean quantity of 3.9*106 M. hyopneumoniae genome copies/mL was detected in pneumonic lungs. The analysis of VNTR copy number demonstrated a high genetic variability of the M. hyopneumoniae strains present in apparently healthy and pneumonic lungs. Strains having 3 VNTR copy number in P97R1, were detected only in pneumonic lungs and strains having 40 and 43 VNTR copy number in P146R3 were detected only in apparently healthy lungs. Despite the genetic variability of M. hyopneumoniae, predominant strains in the swine farms could be identified.

Bem-Estar Animal consiste no estado do animal em sua tentativa de adaptação ao meio ambiente envolvente, podendo ser medido e melhorado com a ação do ser humano. Nos últimos anos o tema “Bem-Estar Animal” tem adquirido importância, resultante das grandes preocupações com o manejo dos animais em vida e constatação da influência que este tem na qualidade da carne post mortem. Este trabalho teve como objetivo determinar o efeito do lote de suínos transportados, respectivo tamanho, tipo de trajeto e do tempo decorrido entre a origem e o abate na ocorrência de lesões, consideradas indicadores mínimos de bem-estar animal em matadouro. Nos matadouros de suínos da região norte de Portugal, foram monitorados 834 animais com relação à ocorrência de lesões compatíveis com lacerações, eritemas cutâneos, hematomas e fraturas, em cinco diferentes lotes. Pela análise global dos dados, verificou-se que as lacerações estavam presentes em 72% dos animais e foi o tipo de lesão mais frequentemente observado. Seguiram-se os eritemas cutâneos em 20%, os hematomas em 11% e as fraturas em apenas 1% dos animais. O tamanho do lote de animais transportados, a duração da viagem e o tempo de permanência no matadouro influenciaram significativamente a ocorrência das lesões monitoradas, nomeadamente lacerações, eritemas e hematomas. | Animal welfare is the state of the animal in its attempts to cope with its environment, and it can be measured and improved by the action of man. Recently, the topic “Animal Welfare” has become more important, resulting from the discovery that the management of animals in life has impact on the post mortem meat quality. This study aimed to determine the effect of transport batch number of pigs transported by batch, type of route and the time elapsed between the exploration and slaughter in the occurrence of lesions, considered as indicators of animal welfare at the slaughterhouse. At one slaughterhouse of pigs located in the northern of Portugal, 834 animals were monitored in order to check the occurrence of lesions consistent with lacerations, erythema, bruising and fractures, from a total of five different transport batches. The global analysis of the data showed that lacerations were present in 72% of animals and was the most common type of lesion, followed by erythema, bruises and broken bones presented in 20%, 11% and 1% respectively. The size of each batch, the duration of the journey and the time spent in the lairage significantly influenced the occurrence of observed lesions, particularly, lacerations, erythema and bruising.

Bem-Estar Animal consiste no estado do animal em sua tentativa de adaptação ao meio ambiente envolvente, podendo ser medido e melhorado com a ação do ser humano. Nos últimos anos o tema “Bem-Estar Animal” tem adquirido importância, resultante das grandes preocupações com o manejo dos animais em vida e constatação da influência que este tem na qualidade da carne post mortem. Este trabalho teve como objetivo determinar o efeito do lote de suínos transportados, respectivo tamanho, tipo de trajeto e do tempo decorrido entre a origem e o abate na ocorrência de lesões, consideradas indicadores mínimos de bem-estar animal em matadouro. Nos matadouros de suínos da região norte de Portugal, foram monitorados 834 animais com relação à ocorrência de lesões compatíveis com lacerações, eritemas cutâneos, hematomas e fraturas, em cinco diferentes lotes. Pela análise global dos dados, verificou-se que as lacerações estavam presentes em 72% dos animais e foi o tipo de lesão mais frequentemente observado. Seguiram-se os eritemas cutâneos em 20%, os hematomas em 11% e as fraturas em apenas 1% dos animais. O tamanho do lote de animais transportados, a duração da viagem e o tempo de permanência no matadouro influenciaram significativamente a ocorrência das lesões monitoradas, nomeadamente lacerações, eritemas e hematomas.