Glutamate dehydrogenase activity of mesophilic lactobacilli isolated from craftmade Italian cheeses
2006
Zago, M. | Rossetti, L. | Maietti, L. | Bonvini, B. | Fornasari, M.E. | Cerri, D. | Carminati, D. | Giraffa, G.
Английский. In this work, the presence of the gene coding for the glutamate dehydrogenase (GDH) and the biological activity of the corresponding enzyme were investigated. Sixty strains belonging to Lactobacillus casei and Lactobacillus plantarum and isolated from craftmade Italian raw milk cheeses were tested by PCR and GDH activity staining. Twenty-seven out of 60 strains (45%) resulted positive for the presence of the GDH gene after PCR protocols specifically designed in this study. In particular, 25 out of 28 strains of L. casei and 2 out of 32 strains of L. plantarum gave the expected PCR products. A GDH zymogram with L-glutamate as substrate and NADPH as cofactor showed a single band of biologically active GDH proteins in 75% of the PCR positive strains. The GDH proteins showed a different size between L. casei e L. plantarum, thus confirming the DNA sequence heterogeneity between the two species observed after sequencing of some of the PCR products. The proposed PCR-based approach can be applied as fast screening system to search for the presence of the GHD gene in mesophilic lactobacilli. The optimization of a PCR protocol for L. casei and L. plantarum could be useful to search for the presence of specific strains with GDH activity, to be used as cheese adjuncts according to different application needs
Показать больше [+] Меньше [-]итальянский. E' stata studiata la presenza del gene codificante l'enzima glutammato-deidrogenasi (GDH) in lattobacilli non-starter isolati da formaggi artigianali italiani prodotti con latte crudo. A tal fine, 60 ceppi di Lactobacillus casei e Lactobacillus plantarum sono stati indagati mediante PCR e la relativa attività enzimatica è stata valutata mediante gel-elettroforesi nativa. Ventisette ceppi su 60 (45%) sono risultati positivi alla PCR; di questi, 25 appartenevano alla specie L. casei e 2 a L. plantarum. Lo zimogramma utilizzando L-glutammato come substrato e NADPH quale cofattore enzimatico ha consentito di individuare una singola banda di proteine GDH biologicamente attive nel 75% dei ceppi risultati positivi alla PCR. La taglia molecolare delle proteine è risultata differente fra le due specie, a conferma dell'eterogeneità di sequenza nucleotidica riscontrata dal sequenziamento di alcuni degli ampliconi ottenuti dopo PCR. Si propone un protocollo PCR per ottenere uno screening rapido di lattobacilli mesofili GDH positivi. L'ottimizzazione di PCR specifiche per L. casei o L. plantarum rappresenta un ulteriore vantaggio nella ricerca di organismi specifici da applicare come colture complementari in diverse situazioni produttive
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