A new method in CNS (central nervous system) in vitro cultures in the mouse: study of effectiveness | Fare in vitro merkezi sinir sistemi kültürlerinde yeni bir metot: etkinlik araştırması

Английский. In this study; to evaluate the effectiveness of collagen coating method, using in the peripheral nervous system cultures, and its involving factors caused from manipulations in central nervous system (CNS) cultures was aimed. Via frontal approach, brains, transected from young Swiss albino mice, were taken into artificial cerebro-spinal fluid immediately and made blocks in agarose gel. With a vibration microtome, 200 μm thickness horizontally live slices were taken in to the dishes filled with culture medium. Tissue sections were analyzed as two groups. In the group 1 (control): fresh slices were evaluated directly. In the group 2: sections were covered with collagen gel (Type I) and left in the incubator (5% CO2) for 3 days. These sections were dyed with calcein and propidium iodide for viability and non-viability and then observed with confocal laser scanning microscope. Images were captured digitally and examined. Since negative effects of high melting temperature of standard agar on the livability, using low melting agar to tissue blocking and high frequency - low speed vibrotome setting to cut were more preferably. In the 3 days cultures, viability/nonviability rates were indicated better values. It is concluded that, in the CNS slicing cultures, collagen coating method was an easier, effective, useful and alternative method to present techniques.

турецкий. Bu çalışmada; Periferik Sinir Sistemi (PSS) kültürlerinde kullanılmakta olan kollajenle kaplama metodunun Merkezi Sinir Sistemi (MSS) dilimleme doku kültürlerinde kullanılabilirliği ve buna etki eden diğer metodolojik faktörlerin etkinliğinin araştırılması amaçlandı. Genç Swiss albino tipi farelerden frontal girişimle çıkarılan beyinler derhal yapay beyin omurilik sıvısı (yBOS) içine alındı ve agaroz jel içinde bloklanıp; vibrasyonlu mikrotomda 200 μm kalınlığında alınan horizontal canlı dilimleme kesitler medyum içine alındı. Doku kesitleri 2 grupta incelendi. Grup 1 (kontrol): alınan taze kesitler doğrudan incelenirken, Grup 2: alınan kesitler kollajenle (Tip I) kaplanarak 3 gün boyunca %5 CO2'li etüvde inkübe edildi. Kesitler, viabilite için calcein ve nonviabilite için propidium iodide ile boyanarak, konfokal lazer taramalı mikroskopta incelenerek görüntüleri alınıp değerlendirildi. Normal agarların erime derecelerinin yüksek oluşu canlılığı etkilediğinden; düşük derecelerde eriyebilen agar ile bloklamanın, ayrıca yüksek frekansdüşük hıza ayarlanmış vibrotomda kesitlerin alınmasının daha uygun olduğu görüldü. 3 günlük kültür sonrası incelemelerde viabilite/ nonviabilite oranlarının kontrol preparatları ile karşılaştırıldığında olumlu düzeylerde olduğu belirlendi. MSS dilimleme kültürlerinde kollajenle kaplama metodunun mevcut metotlara etkin, çalışır ve daha kolay bir alternatif olarak uygulanabileceği histolojik ve fizyolojik olarak gösterildi.