DEVELOPMENT of the SYSTEM of DIFFERENTIATION B.BRONCHISEPTICA AND B. PERTUSSIS BASED ON MULTIPLEX PCR IN the «REAL-TIME» | РАЗРАБОТКА СИСТЕМЫ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ B.BRONCHISEPTICA И B. PERTUSSIS НА ОСНОВЕ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»

Английский. Microbiological differentiation of bacteria of the genus Bordetella, which cause respiratory diseases in humans and animals and at the present time is tricky, due to a phenomenon typical features of these pathogens. The results of modern studies indicate that the molecular-genetic differentiation B. bronchiseptica, B. pertussis and B. parapertussis can be based on the inserted elements (IS). We have put an aim to develop a system of differentiation B. bronchiseptica and B. pertussis based on multiplex PCR in real time mode. After selection and design of relevant oligonucleotides and fluorescent probes, we have conducted studies that have proven that the use as a target of the gene fragment bfrZ allows identification B. bronchiseptica and differentiation from closely related species of B. pertussis and B. parapertussis. The use as a target with the identification of B. pertussis specific fragment of transposase IS481 do not allow to differentiate this type of B. bronchiseptica and B. parapertussis. The proposed primers and fluorescent probe for transposase IS481 can be used as a genus specific target by PCR in real time to identify B. bronchiseptica, B. pertussis and B. parapertussis without specific differentiation.

Русский. Микробиологическая дифференциация бактерий рода Bordetella, являющихся возбудителями респираторных заболеваний человека и животных, в настоящее время представляет определенную сложность, обусловленную фенотипическими особенностями данных патогенов. Результаты ряда современных исследований свидетельствуют, что молекулярно-генетическая дифференциация B. bronchiseptica, B. pertussis и B. parapertussis может быть основана на вставочных элементах (IS). Нами была поставлена цель разработать систему дифференциации B. bronchiseptica и B. pertussis на основе мультиплексной ПЦР в режиме «реального времени». После подбора и дизайна соответствующих олигонуклеотидов и флуоресцентных зондов нами были проведены исследования, доказавшие, что использование в качестве мишени фрагмента гена bfrZ позволяет проводить идентификации B. bronchiseptica и дифференциацию от близкородственных видов B. pertussis и B. parapertussis. Использование в качестве мишени при идентификации B. pertussis специфического фрагмента гена траспозазы IS481 не позволяет дифференцировать данный вид от B. bronchiseptica и B. parapertussis. Предложенные праймеры и флуоресцентный зонд для траспозазы IS481 могут быть использованы в качестве родоспецифической мишени при проведении ПЦР в режиме «реального времени» для идентификации B. bronchiseptica, B. pertussis и B. parapertussis без видовой дифференцировки.