Study of enzymatic stability of the liquid preparations of the recombinant bovine (Bos taurus taurus L.) chymosin | Исследование ферментативной стабильности жидких препаратов рекомбинантного химозина коровы (Bos taurus taurus L.)

Английский. There was developed a technology of production and activation of milk-clotting enzymes (MCE): recombinant chymosin (RC) and recombinant protochymosin (RPC). Preserving agents providing long storage (above 6 months) of MCE without a great loss of their milk-clotting activity (MCA). Genes of cow protochymosin B and chymosin B were cloned within the pET21a vector. To obtain a producer strain E. coli (strain BL21) was transformed by produced recombinant plasmids. RPC was activated by gradual changing the pH. The study involved 2 RPC preparations: RPC1 and RPC2 differing in the protein concentration. After activation of RPC1 and RPC2 and determining their MCA the preparations were mixed to produce RPC3. As preserving agents (PA) there were used sodium chloride solutions in a 10% concentration (PA1, sodium benzoate in 0.4% concentration (PA2) and their mixture (PA3). MCEs of PA were not introduced into a control sample (CS). MCA of RPC1, RPC2 and RPC3 before activation was less than 1.6 con. units/ml, and after activation increased to 505.97, 522.50 and 510.90 con. units/ml, respectively. Monitoring of MCA during storage (t 0-8 deg. C) was carried out on RC. Changing MCA of RC stored for 6 months depended on the type of PA. So, in CS MCA changed from 510.9 to 431. 2 con. units/ml, in variants with PA1, PA2 and PA3 – from 277.0; 518.6 and 282.3 to 220.2; 462.1 and 228.4 con. units/ml, respectively. Thus, the best one of the studied PA appeared to be PA2. a conclusion is made that the obtained results will be taken as basis of crating and improving the production process of domestic RC for cheese making.

Русский. Разрабатывали технологию производства и активации молокосвертывающих ферментных препаратов (МФП): рекомбинантного химозина (РХ) и рекомбинантного протохимозина (РПХ). Подбирали консерванты, обеспечивающие продолжительное (свыше 6 мес.) хранение МФП без существенной потери ими молокосветрывающей активности (МА). Гены прохимозина B и химозина B коровы были клонированы в составе вектора pET21a. Для получения штамма продуцента провели трансформацию E. coli (штамм BL21) полученными рекомбинантными плазмидами. Активацию РПХ проводили путем ступенчатого изменения pH. В исследованиях использовали 2 препарата РПХ: РПХ1 и РПХ2, различающиеся по концентрации белка. После активации РПХ1 и РПХ2 и определения их МА, препараты смешивали и получали препарат РПХ3. В качестве консервантов (КН) использовали растворы хлористого натрия 10%-ной концентрации (КН1), бензоат натрия 0,4%-ной концентрации (КН2) и их смесь (КН3). В контрольный образец (КО) МФП КН не вводили. Установили, что МА РПХ1, РПХ2 и РПХ3 до активации была меньше 1,6 усл. ед./мл, а после активации возросла до 505,97; 522,50 и 510,90 усл. ед./мл соответственно. Мониторинг МА в процессе хранения (t 0-8 град. C) проводили на препарате РХ. Изменение МА РХ, хранящегося в течение 6 месяцев, зависело от вида КН. Так, в КО МА изменялась с 510,9 до 431,2 усл. ед./мл, а в вариантах с КН1, КН2 и КН3 – с 277,0; 518,6 и 282,3 до 220,2; 462,1 и 228,4 усл. ед./мл соответственно. Т.о., наилучшим из изученных КН оказался КН2. Сделан вывод, что полученные результаты лягут в основу создания и совершенствования технологии производства отечественного РХ для сыроделия.