An increase in the viability of ram sperm when cultured in modified medium for in vitro fertilization | Модифицированная среда для подготовки спермиев барана к экстракорпоральному оплодотворению повышает их жизнеспособность

Английский. A long-term preservation of animal reproductive qualities at cell level is necessery for modern breeding, including the use of in vitro fertilization (IVF). The modified IVF medium is offered for the ram sperm cultivation. The semen was sampled from North Caucasian rams (2-3 years of age), according to a routine technique. Sperm was evaluated by organoleptic and microscopic parameters, and the rest preparations were done according to the prototype procedure, described by A.P. Gandhi, and to the developed method, in which the sperm is brought to glucose-yolk-citrate diluent (GYC) and then transferred to medium SOF wash, prepared without glucose and glutamine with bovine serum albumin (6 mg/ml), caffeine (0.2 mg/ml) and heparin (50 mg/ml). The swim up procedure (centrifugation at 200 g for 8 min followed by flotation) was carried out to seperate the best sperm. The developed method increased the activity of sperm from 5.5 to 8.9 points before the swim up procedure and from 6.3 to 8.7 after it; the amount of live sperm increased from 49.8% to 94.3% and from 46.8% to 90.5% respectively, its vitality increased by 1.6 times and the amount of sperm with rectilinear movements - by 1.6 times. Thus, the developed method significantly improves ram sperm qualitative and quantitative characteristics and allows to recommend it for in vitro fertilization procedures in laboratories.

Русский. Длительное сохранение на уровне клетки воспроизводительных качеств животного необходимо для современной селекции, в том числе с применением экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Предложена модифицированная среда для экстракорпорального оплодотворения, адаптированная для культивирования спермиев барана. Сперму баранов северокавказской породы (возраст - 2-3 года) получали согласно принятым стандартам и инструкциям. Отобранные образцы оценивали органолептически и при микроскопировании, дальнейшую подготовку проводили по методике-прототипу, описанной A.P. Gandhi, и по собственной методике, согласно которой сперма вносится в глюкозо-цитратно-желточный разбавитель (ГЦЖ), после чего переносится в среду SOF wash, приготовленную без глюкозы и глютамина с добавлением бычьего сывороточного альбумина (6 мг/мл), кофеина (0,2 мг/мл) и гепарина (50 мкг/мл). Для отделения лучших спермиев проводили процедуру swim up (центрифугирование при 200 g в течение 8 мин с последующей флотацией). Установлено, что при использовании модифицированной методики для дозревания спермиев, их активность повышается с 5,5 до 8,9 балла до процедуры swim up и с 6,3 до 8,7 балла после нее; число живых спермиев, соответственно, увеличивается с 49,8 до 94,3% и с 46,8 до 90,5%, их жизнеспособность возрастает в 1,6 раза, а доля спермиев с прямолинейно-поступательным движением - в 1,6 раза. Таким образом, разработанная методика культивирования сперматозоидов барана, предназначенных для ЭКО, значительно улучшает качественные и количественные характеристики образцов, что позволяет рекомендовать ее применение в лабораториях вспомогательных репродуктивных технологий при подготовке спермы животных к оплодотворению in vitro.