Generation and characterization of the VP1 recombinant protein of the chicken anemia virus | Клонирование и экспрессия в E. coli рекомбинантного белка VP1 вируса инфекционной анемии

Английский. The aim of this study is to obtain a VP1 recombinant protein of the chicken anemia virus (CAV), capable of specifically detecting antibodies in the blood sera of sick chickens. Cloning of a fragment of the VP1 gene of an infectious anemia virus of chickens was performed in the expression plasmids pET15b and pGEX-3T in the context of reading the polyhistidine sequence and glutathione-S-transferase, respectively. The recombinant proteins 6HIS-deltaVP1 and GST-deltaVP1 expressed in E. coli Rosetta (DE3) strains were purified by metal affinity chromatography. Amino acid sequence of recombinant proteins was confirmed by mass spectrometry. The specificity of the interaction of recombinant proteins with polyclonal antibodies was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The ability of the recombinant 6HIS-deltaVP1 protein to detect antibodies in field and blood sera of SPF chickens was evaluated by indirect ELISA. To control the specificity of the antigen, the immune sera of birds for viruses of infectious bronchitis, Newcastle disease, infectious laryngotracheitis, adenoviral infection, Mycoplasma gallisepticum, and negative serum of chickens were used. The recombinant VP1 protein of chicken anemia virus containing a polyhistidine tag (6HIS-deltaVP1) was obtained. It was shown that this recombinant protein is able to specifically detect antibodies in the blood sera of sick chickens. It can be used to detect antibodies to the chicken anemia virus in the serum of sick chickens, and can also be considered as a potential component of vaccines against this virus.

Русский. Цель исследования: получить рекомбинантный белок VP1 вируса инфекционной анемии цыплят (ИАЦ), способный специфически выявлять антитела к вирусу ИАЦ в сыворотках крови больных кур. Клонирование фрагмента гена VP1 вируса инфекционной анемии цыплят проводили в экспрессионные плазмиды pET15b и pGEX-3T в рамках считывания полигистидиновой последовательности и глутатион-S-трансферазы, соответственно. Экспрессированные в штаммах E. coli Rosetta (DE3) рекомбинантные белки 6HIS-дельтаVP1 и GST-дельтаVP1 были очищены методом металл-аффинной хроматографии. Аминокислотную последовательность рекомбинантных белков подтверждали методом масс-спектрометрии. Специфичность взаимодействия рекомбинантных белков с поликлональными антителами определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА). Способность рекомбинантного белка 6HIS-дельтаVP1 к выявлению антител в полевых и сыворотках крови SPF-цыплят оценивали методом непрямого ИФА. Для контроля специфичности антигена использовали иммунные сыворотки птиц к вирусам инфекционного бронхита, ньюкаслской болезни, инфекционного ларинготрахеита, аденовирусной инфекции, Mycoplasma gallisepticum, а также отрицательную сыворотку крови кур. Был получен рекомбинантный белок VP1 вируса ИАЦ, содержащий полигистииновый тэг (6HIS-дельтаVP1). Было показано, что данный рекомбинантный белок способен специфически выявлять антитела к вирусу ИАЦ в сыворотках крови кур. Он может быть использован для выявления антител к вирусу ИАЦ в сыворотке крови больных кур, а также может быть рассмотрен как потенциальный компонент вакцин против данного вируса.