Cytological methods of analysis of haploid plants-regenerants of cabbage (Brassica oleracea L.) obtained in vitro | Цитологические методы анализа гаплоидных растений-регенерантов капусты белокочанной (Brassica oleracea L.), полученных in vitro

Английский. In genetic studies and selection of cabbage cultures, biotechnological methods for creating clean lines – doubled haploids in the culture of anthers and in the culture of isolated microspores are widely used. A common feature of these technologies is that the plants obtained in vitro have different levels of ploidy and along with doubled haploids there are haploid, tetraploid and mixoploid forms. Therefore, the use of new cytological methods of analysis of haploid plants remains an urgent problem. The aim of the work is to establish the genetic nature of regenerated plants of Brassica oleracea L., obtained from reproductive organs in vitro. Isolated anthers and ovaries of white cabbage were cultivated on solid nutrient media containing mineral salts according to the recipe Murashige and Skoog (MS). The obtained regenerated plants were used to calculate the number of chromosomes in the root meristem, as well as the number of chloroplasts in the cells of the closing stomata of leaves using the new universal method of preparing preparations of plant chromosomes – "SteamDrop". As a result there was studied the dependence of the ploidy level on the cultivation conditions. It is shown that regenerative medicine plants of cabbage obtained in vitro from reproductive organs had a different set of chromosomes (n, 3n, 5n). It was found that the number of chloroplasts in stomata cells of regenerative medicine plants was 9 to 45 pieces, while in the source donor plants they were 18-20.

Русский. В генетических исследованиях и селекции капустных культур широко применяют биотехнологические методы создания чистых линий – удвоенных гаплоидов в культуре пыльников и в культуре изолированных микроспор. Общая особенность этих технологий заключается в том, что получаемые in vitro растения обладают разным уровнем плоидности и наряду с удвоенными гаплоидами встречаются гаплоидные, тетраплоидные и миксоплоидные формы. Поэтому применение новых цитологических методов анализа гаплоидных растений остается актуальной проблемой. Цель работы – установить генетическую природу растений-регенерантов Brassica oleracea L., полученных из репродуктивных органов in vitro. Изолированные пыльники и завязи капусты белокочанной культивировали на твердых питательных средах, содержащих минеральные соли по прописи Мурасиге и Скуга (МС). У полученных растений-регенерантов был проведен подсчет числа хромосом в меристеме корня, а также числа хлоропластов в клетках замыкающих устьиц листьев с помощью нового универсального метода приготовления препаратов хромосом растений – "SteamDrop". В результате проведенных исследований была изучена зависимость уровня плоидности от условий культивирования. Показано, что растения-регенеранты капусты белокочанной, полученные in vitro из репродуктивных органов, имели разный набор хромосом (n, 3n, 5n). Установлено, что количество хлоропластов в клетках устьиц растений-регенерантов составило от 9 до 45 шт., в то время как у исходных донорных растений их было 18-20 шт.