Fluorescent antibody enumeration of Vibrio cholerae in the marine environment.

From microcosm studies, V. cholerae and related potential human pathogens enter a viable but nonculturable state. Direct viable counts by epifluorescent microscopy consistently remain higher than corresponding plate counts. Thus, the assumption that pathogens "die-off" or "decay" in the marine environment must be re-evaluated, since stressed or nutrient-starved cells are unable to grow and be enumerated by standard plate count methods. Indirect immunofluorescent microscopy offers a more sensitive detection system for environment sampling for human pathogens. Field indicate that cultures positive for V. cholerae O1 are also positive by fluorescent antibody staining; however, the reverse was not necessarily true. By adapting epifluorescent techniques for environmental studies, a more realistic, i.e., valid estimate of V. cholerae O1 population size can be obtained directly from environmental samples.

D'après une série d'études de microcosmes réalisées dans notre laboratoire, il a été observé que V, cholerae et d'autres pathogènes potentiels pour l'homme sont toujours à l'état viable mais non cultivable en milieu de culture. Les comptages directs de bactéries viables par microscope à épifluorescence restent nettement plus fort que les numérations sur milieu de culture correspondantes. Aussi, l'hypothèse selon laquelle les bactéries pathogènes "meurent" ou "disparaissent" dans l'environnement marin doit être revue, puisque les cellules stressées ou à jeun sont incapables de se développer et d'être dénombrées par les méthodes de culture classiques. La microscopie indirecte par immunofluorescence permet une détection plus sensible pour les pathogènes de l'homme dans les échantillons naturels. Les études indiquent que les cultures positives pour V, cholerae 01 sont aussi positives par la coloration fluorescente des anticorps ; cependant, l'inverse n'est pas forcément vérifié. En adaptant les techniques d'épifluorescence pour les études dans le milieu naturel, une estimation plus proche de la réalité de la taille des populations de V. cho/eraeOl peut être obtenue directement.