Expresión diferencial de proteínas secretadas por candida palmioleophila durante la degradación de aceite de palma

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El presente estudio tuvo como objetivo determinar la expresión diferencial de enzimas secretadas por una cepa lipolítica de C. palmioleophila durante la degradación del aceite de palma. La caracterización de las proteínas fue realizada en diferentes intervalos de tiempo, por medio de un estudio descriptivo experimental con técnicas moleculares como la electroforesis de proteínas SDS-PAGE y electroforesis en 2D. Se encontró que la mayor expresión de perfiles proteicos tanto intracelulares como extracelulares de la cepa SACL-11 de Candida palmioleophila se presentó a las 48 horas de exposición al aceite de palma. El perfil proteico intracelular estuvo conformado por nueve bandas proteicas diferentes con un rango de peso molecular desde los 18.7 hasta los 216.5 KDa, dentro de las cuales las proteínas extracelulares con pesos moleculares de 52.9 KDa y 45.9 KDa podrían corresponder a lipasas y/o esterasas encargadas del proceso de biotransformación del aceite de palma. Además, una banda de 49.2 KDa presentó similitud con las lipasas LIP4 y LIP8 descritas previamente para Candida albicans. En cuanto a los perfiles bidimensionales, se observó una mayor cantidad de spots para las proteínas extracelulares en comparación con las intracelulares. El estudio demostró que en efecto existen diferencias entre los perfiles proteicos de las enzimas extracelulares secretadas por Candida palmioleophila SACL-11 a través del tiempo, especialmente en la cantidad de bandas/spots expresados, en su peso molecular y punto isoeléctrico durante la degradación del aceite de palma.

The objective of the present study was to determine the differential expression of enzymes secreted by a lipolytic strain of C. palmioleophila during the degradation of palm oil. The characterization of the proteins was carried out in different time intervals, by means of an experimental descriptive study with molecular techniques such as SDS-PAGE and 2D electrophoresis. The highest expression of both intracellular and extracellular protein profiles of the SACL-11 strain of Candida palmioleophila occurred 48 hours after exposure to palm oil. The intracellular protein profile consisted of nine different bands with a molecular weight range from 18.7 KDa to 216.5 KDa, within which extracellular proteins with molecular weights of 52.9 KDa and 45.9 KDa could correspond to lipases and / or esterases involved in palm oil biotransformation. In addition, a 49.2 KDa band resembled LIP4 and LIP8 lipases described previously in Candida albicans. Regarding the two-dimensional profiles, a higher number of spots was observed for intracellular proteins compared to extracellular ones. The study showed that there are differences between the protein profiles of the extracellular enzymes secreted by Candida palmioleophila SACL-11 over time, especially in the number of bands / spots expressed, in their molecular weight and isoelectric point during the degradation of palm oil.

Pregrado

Microbiólogo Industrial

1. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................ 12 2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ..................................................................... 16 3. JUSTIFICACIÓN.......................................................................................................... 18 4. PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN ........................................................................... 20 5. HIPÓTESIS ................................................................................................................... 21 6. MARCO TEÓRICO ...................................................................................................... 22 6.1. Grasas y aceites .......................................................................................................... 22 6.2 Aceite de palma .......................................................................................................... 23 6.3. Contaminación ambiental por grasas y aceites .......................................................... 25 6.4. Degradación biológica de grasas y aceites................................................................. 26 6.5. Candida palmioleophila ............................................................................................ 27 6.6. Lipasas ....................................................................................................................... 29 6.6.1. Lipasas producidas por el género Candida spp. .................................................. 32 7. ANTECENDENTES ..................................................................................................... 36 8. OBJETIVOS.................................................................................................................. 40 8.1 General ........................................................................................................................ 40 8.2 Específicos .................................................................................................................. 40 9. METODOLOGÍA ......................................................................................................... 41 9.1 Tipo de estudio. ........................................................................................................... 41 9.2 Material Biológico. ..................................................................................................... 41 9.3 Reactivación del Candida palmioleophila. ................................................................. 41 9.4 Cultivo de Candida palmioleophila en presencia de aceite de palma. ....................... 42 9.5 Separación de proteínas extracelulares. ...................................................................... 42 9.5.1 Obtención de proteínas intracelulares. ................................................................. 43 9.6 Electroforesis de proteínas SDS-PAGE. ..................................................................... 43 9.7 Isoelectroenfoque y electroforesis en 2D. ................................................................... 44 9.8 Determinación de la variabilidad de los perfiles proteicos ......................................... 45 10. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................... 46 10.1 Cultivo de C. palmioleophila en presencia de aceite de palma ................................ 46 10.2 Determinación de variabilidad de perfiles proteicos SDS-PAGE ............................ 46 10.3 Caracterización de proteínas lipolíticas por 2D-EF .................................................. 51 11. CONCLUSIONES ..................................................................................................... 56 12. RECOMENDACIONES ........................................................................................... 58 13. BIBLIOGRAFÍA ....................................................................................................... 59

Ej. 1