Detecção de metástases em linfonodos regionais e no sistema nervoso central por imuno-histoquímica em cães com neoplasmas mamários malignos | Detection of metastases in regional lymph nodes and central nervous system through immunohistochemistry in dogs with malignant mammary neoplasms

This work was divided in two parts, resulting in two scientific articles. In the first article, the aim was to identify metastatic isolated tumor cells (ITCs) in lymph nodes of dogs with tubulopapillary mammary carcinoma, through immunohistochemistry (IHC) for cytokeratin, in which it was not possible to detect neoplastic cells with routine histopathological exam (HE). Additionally, IHC was combined with histochemistry techniques, such as Perls’ Prussian blue and periodic acid-Schiff (PAS), to improve the detection of occult metastases when hemosiderin and/or ceroid were, respectively, present in macrophages of these lymph nodes. The ITCs were found in 24.1% (7/29) of mammary lymph nodes analyzed. These ITCs were located mainly in subcapsular sinuses (4/7; 57.1%). Hemosiderin and ceroid were present in about 90% of the 29 lymph nodes analyzed. In 42.8% (3/7) of lymph nodes with ITCs, hemosiderin and/or ceroid were in the same location of ITCs. It was found that lymph nodes in which ITCs were detected, also present high amounts of hemosiderin (3/7; 42.9%) and low amounts of ceroid (5/7; 71.4%). In this study, IHC combined with histochemistry techniques was a useful method to investigate occult metastases in lymph nodes, mainly when pigments as hemosiderin and ceroid were present. In the second article, the aim was to characterize clinicopathological aspects of dogs with malignant mammary tumors and with neurological involvement, including identification of occult neoplastic cells in the central nervous system (CNS) of these dogs, trough IHC for cytokeratin. There were 26 selected dogs with malignant mammary tumors and with neurological involvement. Based on the results, these dogs were divided in four groups: group 1 (n=7), group 2 (n=11), group 3 (n=4), and group 4 (n=4). The most common histological subtype of primary mammary tumors was tubulopapillary carcinoma (23%). The main neurological signs found were seizures in group 1 and group 2 (4/7; 57,1% and 4/11; 36,4%) and ataxia in group 3 (3/4; 75%). Gross CNS lesions were found mainly as solitary lesions (5/7; 71,4%), and predominantly in occipital cortex (4/7; 57,1% and 2/3; 66,6%) in groups 1 and 4. Histopathological lesions in CNS as malacia, thrombosis, infarct, neovascularization, hemorrhage, and wallerian degeneration were observed in different frequencies in groups 1 to 4. All these lesions were observed in the same neurolocalization of neoplastic cells detected by HE and/or IHC. Neoplastic cells were observed as single tumor cells, micrometastases, and neoplastic emboli. It was located in parenchyma (50-100%), meninges (42,8%-100%), and ventriculi (14,3%-33,3%) in groups 1 to 4. This study allowed the characterization of metastases from mammary tumors to the CNS of dogs. Additionally, through histopathological and IHC analyses it was possible to detected occult metastases, to map their neurolocalization and to observe other simultaneous histopathological lesions in CNS.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Esta tese foi dividida em duas partes, resultando em dois artigos científicos. No primeiro artigo, o objetivo foi identificar células tumorais isoladas (CTIs) metastáticas em linfonodos de cães com carcinoma mamário túbulo-papilar, através da imuno-histoquímica (IHQ) para citoqueratina, nos quais não foi possível detectar células neoplásicas pela avaliação de rotina histopatológica (HE). Adicionalmente, a IHQ foi combinada com técnicas histoquímicas como azul da Prússia e ácido periódico de Schiff (PAS), para melhorar a detecção de metástases ocultas quando a hemossiderina e/ou ceroide, respectivamente, estavam presentes em macrófagos nesses linfonodos. As CTIs foram encontradas em 24,1% (7/29) dos linfonodos mamários analisados. Essas CTIs estavam localizadas principalmente em seios subcapsulares (4/7; 57,1%). Hemossiderina e ceroide estavam presentes em 90% dos 29 linfonodos analisados. Em 42,8% (3/7) dos linfonodos com CTIs, hemossiderina e/ou ceroide estavam na mesma localização das CTIs. Foi observado que linfonodos nos quais CTIs foram detectadas, também apresentaram grande quantidade de hemossiderina (3/7; 42,9%), e pequena quantidade de ceroide (5/7; 71,4%). Neste estudo, a IHQ combinada com técnicas histoquímicas foi um método útil para investigação de metástases ocultas em linfonodos, especialmente quando pigmentos como hemossiderina e ceroide estavam presentes. No segundo artigo, o objetivo foi caracterizar aspectos clínico-patológicos de cães com tumores mamários malignos e com envolvimento neurológico, incluindo a identificação de células neoplásicas ocultas no sistema nervoso central (SNC) destes cães, através da IHQ para citoqueratina. Foram selecionados 26 cães com tumores mamários malignos e com envolvimento neurológico. Com base nos resultados, estes cães foram separados em quatro grupos: grupo 1 (n=7), grupo 2 (n=11), grupo 3 (n=4) e grupo 4 (n=4). O subtipo histológico do tumor primário de mama mais encontrado foi o carcinoma túbulo-papilar (23%). Os principais sinais neurológicos encontrados foram convulsões nos grupos 1 e 2 (4/7; 57,1% e 4/11; 36,4%), e ataxia no grupo 3 (3/4; 75%). Lesões macroscópicas no SNC foram encontradas principalmente como lesões solitárias (5/7; 71,4%) e predominantemente no córtex occipital (4/7; 57,1% e 2/3; 66,6%) nos grupos 1 e 4. Lesões histopatológicas no SNC como malacia, trombose, infartos, neovascularização, hemorragia e degeneração walleriana foram observadas em diferentes frequências nos grupos 1 ao 4. Todas estas lesões foram observadas na mesma neurolocalização das células neoplásicas detectadas por HE e/ou IHQ. Células neoplásicas foram observadas como células isoladas tumorais, micrometástases e êmbolos neoplásicos. Estavam localizadas no parênquima (50-100%), meninges (42,8%-100%), e ventrículos (14,3%-33,3%) nos grupos 1 ao 4. Este estudo permitiu a caracterização de metástases de tumores mamários para o CNS em cães. Além disso, através da análise histopatológica e da IHQ, foi possível a detecção de metástases ocultas, seu mapeamento, e observação da presença simultânea de outras lesões histológicas no CNS.