Comparação de métodos de extração de fumonisinas e ocratoxina A em milho | Comparison of fumonisin and ochratoxin A extraction methods in maize

Monografia (especialização) - Universidade Federal de Santa Maria, Centro de Ciências Rurais, Curso de Especialização em Residência em Área Profissional de Saúde - Medicina Veterinária: Medicina Veterinária Preventiva, RS, 2022.

Maize is one of the main cereals produced in the world and has great relevance in human food and animal protein production. It is a grain highly susceptible to contamination by mycotoxins, mainly fumonisins and ochratoxin A, which are toxic products resulting from the secondary metabolism of filamentous fungi such as Fusarium, Aspergillus and Penicillium, respectively. The objective of this work is to compare the creation of a new extraction solution with a certified and validated methodology for the recovery of fumonisins and ochratoxin A. To achieve this objective, experiments were carried out with 20 samples of ground corn and free of contamination by fumonisins and ochratoxin A. After homogenization, the samples were separated into two groups for preliminary tests using the extraction solution with MeOH:H2O (80:20, v:v) in group A and the extraction solution with ACN:H2O:AF (80:19.9:0.1, v:v:v) in group B. From the results obtained from these preliminary tests, the solution A was chosen for the validation test and modified with the addition of 5g of NaCl and only fumonisins were considered for the comparison of methods. This procedure lasted for three consecutive days and after reading and analyzing the HPLCMS/ MS, the average recovery results obtained on the 1st, 2nd and 3rd days were 41.2%, 48.9% and 22, 3% and 58.6%, 45.9% and 53.9% for FB1 and FB2, respectively. The comparison of these results with the methodology used in the laboratory, shows differences in the organic solvent used and also in the recovery, which was found between 97-99% being within the range of acceptance by the Commission Regulation. With the results obtained, it was possible to conclude that the extraction solution created did not interact correctly with the target mycotoxins, resulting in recoveries below 60% showing a great difference compared to the excellent recovery of the official and certified laboratory methodology.

O milho é um dos principais cereais produzidos no mundo e apresenta grande relevância na alimentação humana e produção de proteína animal. É um grão altamente susceptível a contaminação por micotoxinas, principalmente as fumonisinas e ocratoxina A, que são produtos tóxicos resultantes do metabolismo secundário de fungos filamentosos como Fusarium, Aspergillus e Penicillium, respectivamente. O objetivo deste trabalho é comparar a criação de uma nova solução de extração com uma metodologia certificada e validada para recuperação de fumonisinas e ocratoxina A. Para atingir este objetivo foram realizados experimentos com 20 amostras de milho moído e livres de contaminação por fumonisinas e ocratoxina A. Após homogeneização, as amostras foram separadas em dois grupos para testes preliminares utilizando a solução de extração A com MeOH:H2O (80:20, v:v) no grupo A e a solução de extração B com ACN:H2O:AF (80:19,9:0,1, v:v:v) no grupo B. A partir dos resultados obtidos destes testes preliminares, a solução A foi escolhida para a realização do teste de validação e ainda foi modificada com o acréscimo de 5g de NaCl (MeOH:H2O:NaCl, 80:20:5), e somente as fumonisinas foram consideradas para a comparação de métodos. Este procedimento teve a duração de três dias consecutivos e após a leitura e análise em HPLCMS/ MS, os resultados da média de recuperação obtidas nos 1º, 2º e 3º dias foram de 41,2%, 48,9% e 22,3% e 58,6%, 45,9% e 53,9% para FB1 e FB2, respectivamente. A comparação do método criado utilizando a solução de extração A (modificada) com a metodologia oficial utilizada pelo laboratório, mostram diferenças no solvente orgânico utilizado pelo laboratório e também na porcentagem média de recuperação, que se encontrou entre 97-99% estando dentro da faixa de aceitação pelo Commission Regulation. Com os resultados obtidos, foi possível concluir que a solução de extração criada não interagiu corretamente com as micotoxinas alvo, resultando em recuperações abaixo de 60% mostrando uma grande diferença em comparação a excelente recuperação da metodologia oficial e certificada do laboratório.