Embryogenic calli induction from nucellar tissue of Citrus cultivars Indução de calos embriogênicos a partir de nucelos de variedades de Citrus

Nucellar tissues of seven Citrus varieties were introduced onto three growth media to produce embryogenic callus. The media tested were: EME [MT, modified, with the addition of malt extract (500 mg.L-1)]; 1/2-EME [half concentration of MT macronutrients + half concentration of BH3 macronutrients + 500 mg.L-1 malt extract + 1.55 g.L-1 of glutamine]; and EBA [EME + 0.44 muM 6-benzyladenine + 0.04 muM 2,4 D]. Soft friable calli were obtained from 'Cravo' and 'Ponkan' mandarins (Citrus reticulata, Blanco), 'Murcott' tangor (Citrus reticulata Blanco x Citrus sinensis L. Osbeck), 'Serra d'água' and 'Valencia' sweet oranges (Citrus sinensis, L. Osbeck) 120 days after callus induction. 'Natal' and 'Pera' sweet oranges (Citrus sinensis, L. Osbeck) produced hard non-friable calli in this period. EME and 1/2-EME media had the best results for 'Cravo' mandarin, 'Ponkan' mandarin and 'Serra d'água' sweet orange, whereas EBA was the best media composition to induce soft friable calli on 'Murcott' tangor and 'Valencia' sweet orange. Friable callus cultures of 'Cravo' and 'Ponkan' mandarins, and 'Murcott' tangor yielded high quality protoplasts after isolation. Abbreviations: a.c. - activated charcoal; BA - 6-benzyladenine; IAA - indole-acetic acid; 2,4-D - 2,4-diclorophenoxyacetic acid; MT - Murashige & Tucker basal medium.<br>Nucelos de sete variedades de Citrus foram introduzidos em três meios de cultura para produção de calos embriogênicos. Os meios de cultura testados foram: EME [MT, modificado pela adição de extrato de malte (500 mg.L-1)]; 1/2-EME [1/2 concentração de macronutrientes no meio MT + 1/2 concentração de macronutrientes no meio BH3 + 500 mg.L-1 extrato de malte + 1,55 g.L-1 de glutamina]; e EBA [EME + 0,44 miM 6-benziladenina + 0,04 miM 2,4 D]. Calos friáveis foram obtidos nas variedades tangerinas 'Cravo' e 'Ponkan' (Citrus reticulata, Blanco), tangor 'Murcote' (Citrus reticulata Blanco x Citrus sinensis L. Osbeck), laranja 'Valencia' (Citrus sinensis L. Osbeck) e lima 'Serra d'água' (Citrus sinensis L. Osbeck) 120 dias após a instalação do ensaio. As laranjas 'Natal' e 'Pera' (Citrus sinensis L. Osbeck) produziram calos duros de crescimento lento neste período. Os meios EME e 1/2-EME mostraram os melhores resultados para as tangerinas 'Cravo' e 'Ponkan' e lima 'Serra d'água', enquanto que EBA foi o melhor meio de cultura para indução de calos friáveis de tangor 'Murcote' e laranja 'Valencia'. Calos friáveis das variedades, tangerinas 'Cravo' e 'Pokan' e tangor 'Murcote' foram subcultivados e apresentaram bom rendimento e qualidade de protoplastos após isolamento.