Evaluación de los efectos in vitro de gel rico en plaquetas autólogo en explantes de cartílago y membrana sinovial de caninos desafiados con lipopolisacarido

Ilustracions, gráficas

spa:Antecedentes: hay escasos estudios in vitro que indiquen los mecanismos básicos por los que el plasma rico en plaquetas (PRP) es útil en el tratamiento clínico de perros con OA de origen natural. Métodos: los explantes de cartílago y membrana sinovial de seis perros fueron desafiados con LPS y cultivados durante 48 h con gel pobre en plaquetas y sobrenadantes de gel rico en plaquetas (PPGS y PRGS) en concentraciones del 25% y 50%, respectivamente. Los explantes de tejido desafiados con LPS fueron co-cultivados durante 48 h y los medios de cultivo fueron muestreados a 1 y 48 h para la determinación, por ELISA, de IL-1, IL-10, ácido hialuronico, TGF1 y PDGF-BB. Resultados: Las concentraciones de IL-1 fueron significativamente mayores en los grupos de explantes de tejido cultivados con PRGS al 50% y PPGS al 25% a las 48 h en comparación con el resto de los grupos experimentales en cualquier momento. La IL-10 y la HA presentaron concentraciones similares en todos los grupos valorados en cualquier momento. El TGF-1 y el PDGF-BB presentaron mayores concentraciones en los medios de cultivo de los explantes de tejido cultivados con PPGS y PRGS al 50%, que disminuyeron con el tiempo. Conclusiones: Tanto el PPGS como el PRGS a ambas concentraciones mostraron un efecto biológico limitado en los explantes de cartílago y membrana sinovial en co-cultivo con LPS e incluso el PPGS al 25% y el PRGS al 50% mostraron un efecto pro inflamatorio en estos tejidos a las 48h.

eng:Background: There are few in vitro studies indicating the basic mechanisms by which platelet-rich plasma (PRP) is useful in the clinical treatment of dogs with naturally occurring OA. Methods: cartilage and synovial membrane explants from six dogs were challenged with LPS and cultured for 48 h with platelet-poor gel and platelet-rich gel supernatants (PPGS and PRGS) at concentrations of 25% and 50%, respectively. Tissue explants challenged with LPS were co-cultured for 48 h and culture media were sampled at 1 and 48 h for ELISA determination of IL-1, IL-10, hyaluronic acid, TGF-1 and PDGFBB. Results: IL-1 concentrations were significantly higher in the groups of tissue explants cultured with PRGS at 50% and PPGS at 25% at 48 h compared to the rest of the experimental groups at any time. IL-10 and HA showed similar concentrations in all assessed groups at any one time. TGF-1 and PDGF-BB had higher concentrations in the culture media of tissue explants grown with PPGS and PRGS at 50%, which decreased over time. Conclusions: Both PPGS and PRGS at both concentrations showed a limited biological effect in cartilage and synovial membrane explants in co-culture with LPS and even PPGS at 25% and PRGS at 50% showed a pro-inflammatory effect on these tissues at 48h.

LISTA DE ABREVIATURAS/ INTRODUCCIÓN/ PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA / MATERIALES Y MÉTODOS / Animales/ Extracción de sangre y procesamiento de los hemocomponentes / Obtención de plasma rico en plaquetas y plasma / Recolección de cartílago y membrana sinovial/ Cultivo conjunto de explantes de tejido in vitro y diseño del estudio / Figura 1. Diseño y metodología del estudio. HA, ácido hialuronico; IL, interleucina; LPS, lipopolisacárido; PLT, plaqueta; PDGF-BB: isoforma BB del factor de crecimiento derivado de las plaquetas; PPP/PPGS: sobrenadante de plasma pobre en plaquetas/gel pobre en plaquetas; PRP/PRGS: sobrenadante de plasma rico en plaquetas/gel rico en plaquetas; TGF-1: factor de crecimiento transformante beta 1; WBC: glóbulos blancos.12 Medición de citoquinas, ácido hialuronico y factores de crecimiento/ Análisis estadístico / RESULTADOS / Recuentos celulares en sangre total y hemoderivados/ Figura 2. Concentraciones celulares en sangre total y hemoderivados. (a) Concentraciones medias (sd) de plaquetas en sangre total, PRP y PPP (b) Concentraciones medias (sd) de leucocitos en sangre total, PRP y PPP. a-c= diferentes letras minúsculas representan diferencias significativas (P 0,05) entre los hemocomponentes para la concentración de plaquetas y leucocitos. Acrónimos como en la figura 1. / Concentraciones de factores de crecimiento, citocinas e ácido hialuronico en los sobrenadantes del gel rico en plaquetas y del gel pobre en plaquetas/ Concentraciones de factores de crecimiento, citocinas e ácido hialuronico en los medios de cultivo a 1 y 48h/ Figura 3. Concentraciones de biomoléculas en ambos hemocomponentes, el sobrenadante de gel pobre en plaquetas (PPGS) y el sobrenadante de gel rico en plaquetas (PRGS). (a) Concentraciones medias (± d.s.) de interleucina 1 beta (IL-1) en PPGS y PRGS (b) Concentraciones medias (± d.s.) de interleucina 10 (IL-1) en PPGS y PRGS. (c) Concentraciones medias (± d.s.) de hialuronano (HA) en PPGS y PRGS. (d) Media (± d.s.) de las concentraciones del factor de crecimiento transformante beta 1 (TGF-1) en PPGS y PRGS. (e) Concentraciones medias (± d.s.) de la isoforma BB del factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF-BB) en PPGS y PRGS. a= las letras minúsculas diferentes representan diferencias significativas (P 0,05) entre los hemocomponentes para las biomoléculas. Acrónimos como en la figura 1. / (b)/ 4 Figura 4. Concentraciones de Citoquinas en los medios de cultivo de los grupos experimentales a la hora y a las 48 horas (a) (a) media (± s.d) concentraciones de IL-1β (pg/ml) (b) Media (± s.d) Concentraciones de IL-10 (pg/ml). a-c= letras minúsculas diferentes representan diferencias significativas (P< 0,01) entre los grupos de experimentación en cada momento independiente. A-B= las diferentes letras mayúsculas representan diferencias significativas (P< 0,01) entre los grupos de experimentación en cada momento independiente. A-B= las diferentes letras mayúsculas representan diferencias significativas (P

Maestría

Magister en Ciencias Veterinarias

Medicina Regenerativa en pequeños animales