Entwicklung und Validierung von Fisch-spezifischen Real-Time PCR Systemen zur Detektion von Allergenen in Lebensmitteln

Немецкий. In Deutschland leiden laut Angaben der EFSA 1-3% der Erwachsenen und 4-6% der Kinder an einerNahrungsmittelallergie, also einer Hypersensitivität die auf der Beteiligung des Immunsystemsberuht und durch potente Allergene ausgelöst wird (EFSA, 2004). Neben Hühnereiweiß undRohgemüse zählt Fisch mittlerweile zu einem der bedeutsamsten Auslöser einerNahrungsmittelallergie. Dies mag an der erhöhten Verzehrmenge liegen, wenn auch das Auftretenallergischer Reaktionen auf Fisch einem deutlichen Nord-Süd-Gefälle unterliegt, so dass Länder wieItalien aber auch Japan weitaus höhere Angaben über die Zahlen der Betroffenen machen (alles-zurallergologie/a, Aranashi et al., 2004). Dennoch ist es auch in Deutschland sowohl für dieLebensmittelüberwachung als auch für den Verbraucherschutz von hohem Interesse,allergieauslösende Markergene zu identifizieren und nachzuweisen. Dies sollte in dieser Arbeit,abweichend der bisher etablierten immunologischen Verfahren, über innovative, auf DNAbasierendenMethoden geschehen. In dieser Arbeit wurde somit das HauptfischallergenParvalbumin mittels Spezies-spezifischer real-time PCR Systemen nachgewiesen. Dazu musstezuerst Fisch-DNA verschiedener Fischarten mit befriedigender Qualität und Quantität gewonnenwerden. Vielfältige, auf dem CTAB-Extraktionsprotokoll basierende Methoden wurden dabeigetestet und optimiert. Die daraus gewonnene DNA konnte für die weitere Entwicklung einerqualitativen Fischartenübergreifenden SYBR Green-Nachweismethode verwendet werden.Zusätzlich wurden ein Makrelen-spezifisches sowie ein Schollen-spezifisches real-time PCR Systementwickelt. Um geeignete amtliche Standardmethoden zur Überprüfung der gesetzlichenKennzeichnungspflicht zu etablieren und diese Methoden operationalisierbar und somit inunterschiedlichen Laboratorien anwendbar zu machen, wurden die entwickelten real-time PCRSysteme einem einheitlichen Validierungsschema unterzogen durch das hinreichende Sensitivität,Spezifität und Effizienz gewährleistet wird. Das entwickelte Schollen-spezifische als auch dasMakrelen-spezifische real-time PCR System konnte in dieser Arbeit innerhalb der für die Validierungfestgelegten internen Kriterien erfolgreich validiert werden. Diese Validierung ermöglicht dieFestlegung unterer Nachweisgrenzen und somit die Einführung von Ausschlussgrenzen bzw.Schwellenwerten. Für den Verbraucher bedeutet dies eine wesentlich geringere Einschränkung derAuswahlmöglichkeiten der Lebensmittel und steigert so erheblich das Produktangebot.