Análisis de la unión diferencial de proteínas de tomate (Solanum lycopersicum) a promotores de genes de la síntesis de giberelinas mediante ensayo de luciferasa | Analysis of the differential binding of tomato proteins to gibberellin synthesis gene promoters by luciferase assay | Anàlisi de la unió diferencial de proteïnes de tomaca a promotors de gens de la síntesi de gibberel·lines mitjançant assaig de luciferasa

[ES] Los ensayos de luciferasa permiten analizar la regulación de un gen por parte de proteínas de interés a nivel transcripcional. Se utiliza la enzima reportera luciferasa que en presencia de un sustrato genera bioluminiscencia. En este Trabajo de fin de grado se analiza la unión de tres proteínas de tomate (proteínas efectoras) a los promotores de dos genes necesarios para la síntesis de giberelinas, SlGA20oxidase1 y SlGA3oxidase2 y, cuál es su efecto en la regulación de su expresión. En estudios previos del laboratorio se determinó mediante análisis bioinformáticos que en estos promotores hay posibles secuencias de unión para estas proteínas efectoras, aunque se desconoce si son parte de la regulación de estos dos genes. Para realizar el ensayo de luciferasa, se generarán fusiones entre los promotores de los genes a analizar y la secuencia codificante del gen de la luciferasa. Por otra parte, se obtendrán construcciones en que las proteínas efectoras se situarán bajo un promotor constitutivo que asegure altos niveles de expresión en el ensayo. Las construcciones finales se transformarán en Agrobacterium tumefaciens y los ensayos de regulación se llevan a cabo de forma transitoria mediante agroinfiltración de hojas de Nicotiana benthamiana, obteniéndose la medida de la actividad luciferasa en un luminómetro. Este ensayo permitirá analizar el efecto de las tres proteínas tanto individual como en combinación, en la regulación de dos genes clave en la síntesis de giberelinas en plantas de tomate.

[EN] Luciferase assays allow the analysis of gene regulation by proteins of interest at the transcriptional level. The reporter enzyme luciferase, in the presence of a substrate, generates bioluminescence. In this final degree project, the binding of three tomato proteins (effector proteins) to the promoters of two genes necessary for the synthesis of gibberellins, SlGA20oxidase1 and SlGA3oxidase2, will be analyzed, as well as their effect on the regulation of these genes' expression. Previous laboratory studies determined, through bioinformatic analysis, the presence of potential binding sequences for these effector proteins in these promoters, although it is still unknown whether they play a role in the regulation of these two genes. To perform the luciferase assay, fusions will be generated between the promoters of the genes of interest and the coding sequence of the luciferase gene. Additionally, constructs will be created in which the effector proteins will be placed under a constitutive promoter that ensures high levels of expression in the assay. The final constructs will be transformed into Agrobacterium tumefaciens, and the regulation assays will be conducted transiently via agroinfiltration of Nicotiana benthamiana leaves, followed by the measurement of luciferase activity using a luminometer. This assay will allow the analysis of the effect of the three proteins, both individually and in combination, on the regulation of two key genes involved in gibberellin synthesis in tomato plants.

García Sánchez, J. (2025). Análisis de la unión diferencial de proteínas de tomate (Solanum lycopersicum) a promotores de genes de la síntesis de giberelinas mediante ensayo de luciferasa. Universitat Politècnica de València. https://riunet.upv.es/handle/10251/221354

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