Detection and isolation of caprine lentivirus in goat umbilical cord cells | Detecção e isolamento de lentivírus caprino em células do cordão umbilical de cabras

Английский. Small ruminant lentiviruses (SRLVs), which include caprine and ovine lentiviruses, cause serious damage to the health of their hosts, considerably reducing production and increasing culling. The intrauterine route may be an important route of transmission of SRLVs, as they have already been detected in neonates. Furthermore, umbilical cord cells show permissiveness to the multiplication of these viruses in vitro. Thus, this study aimed to detect and isolate caprine lentivirus from mesenchymal cells of Wharton's jelly from goat umbilical cord. Fifteen umbilical cords were collected from eight goats (seven positive and one negative for SRLV via nPCR) that underwent cesarean section and immersed in 0.9% saline solution. Subsequently, the Wharton's jelly was removed and cultured in enriched minimum essential medium (MEM) in an incubator at 37 °C and 5% CO2 for 63 days. The medium was changed every seven days, and trypsinization and collection of the supernatant for nested polymerase chain reaction (nPCR) were performed every 21 days. Three samples were randomly selected for DNA sequencing based on the positive nPCR results to identify the viral isolate. 40% (6/15) of the cords were positive for caprine lentivirus (Lentivirus capartenc), previously called caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV). One out of the six positive cords remained positive since the first supernatant collection. All samples, except for the lost plots, showed cell destruction and the presence of syncytium ranging from a very mild to an intense level. We also found that 26% (4/15) of the offspring, with blood collected at birth, presented positive nPCR results for caprine lentivirus. The DNA sequences, when aligned, presented homology with each other, with the standard strains CAEV Co and MVV K1514, and with some Brazilian isolates described in the literature. Therefore, caprine lentivirus may be present in mesenchymal cells of Wharton's jelly from the umbilical cord of naturally infected goats in the form of proviral DNA, posing a risk of fetal contamination.

португальский. Os lentivírus de pequenos ruminantes (LVPRs), os quais englobam os lentivírus caprino e ovino, causam danos graves à saúde dos seus hospedeiros, diminuindo consideravelmente a produção e aumentando o descarte. A via intrauterina pode ser uma importante via de transmissão de LVPRs, uma vez que já foram detectados em recém-nascidos. Ademais, células do cordão umbilical apresentam permissividade à multiplicação desses vírus in vitro. Assim, objetivou-se detectar e isolar lentivírus caprino a partir de células mesenquimais da geleia de Wharton de cordão umbilical de cabras. Coletou-se 15 cordões umbilicais de oito cabras (sete positivas e uma negativa para LVPR via nPCR) submetidas à cesariana, os quais foram imersos em solução salina a 0,9% tratada. Em seguida, retirou-se a geleia de Wharton para cultivo em meio essencial mínimo (MEM) enriquecido, em estufa a 37°C e 5% de CO2, por 63 dias. Realizou-se troca de meio a cada sete dias, e a cada 21 dias realizou-se tripsinização e coleta do sobrenadante, destinado à reação em cadeia de polimerase nested (nPCR). A partir dos resultados positivos na nPCR foram escolhidos, aleatoriamente, três amostras para sequenciamento de DNA com finalidade de identificar o isolado viral. Observou-se que 40% (06/15) dos cordões foram positivos para lentivírus caprino (Lentivirus capartenc), anteriormente denominado vírus da artrite encefalite caprina (CAEV). Dos seis cordões positivos, um permaneceu positivo desde a primeira coleta do sobrenadante. Todas as amostras, com exceção das parcelas perdidas, apresentaram destruição celular e presença de sincício variando de um nível muito leve a um nível intenso. Constatamos também que 26% (04/15) das crias, com sangue coletado ao nascimento, apresentaram resultados positivos de nPCR para lentivírus caprino. As sequências de DNA quando alinhadas, revelou homologia entre si, e com as cepas padrões CAEV Co e MVV K1514 e com alguns isolados brasileiros descritos na literatura. Conclui-se que lentivírus caprino pode estar presente em células mesenquimais da geleia de Wharton de cordão umbilical de cabras naturalmente infectadas na forma de DNA pró-viral, oferecendo o risco de contaminação fetal.