Reinigung und funktionelle Rekonstitution eines spannungsabhaengigen Kaliumkanals aus der Plasmamembran von Vicia faba L.
1990
Zeilinger C. | Weiler E.W.
DEUTSCH: An Plasmamembranen, welche mit der waessrigen Phasenverteilungstechnik aus Blaettern von Vicia faba L. hergestellt wurden, konnten Rubidiumfluesse unter Einsatz des Radioisotopes Rubidium-86 gemessen werden. Rubidium kann in den meisten Faellen als Ersatz fuer Kalium bei Ionentransportstudien eingesetzt werden, da die Transportsysteme kaum zwischen den beiden Ionen unterscheiden. Die Aufnahme von 86Rb+ in die Membranvesikel wurde durch Tetraethylammoniumchlorid (I50 = 5 mM) und Aluminiumchlorid (I50 = 0,5 mM) inhibiert. Eine Tetraethylammoniumchlorid-sensitive 86Rb+-Aufnahme konnte ebenfalls an rekonstituierten Proteoliposomen gemessen werden. Aus solubilisierten Plasmamembranproteinen konnte durch Ionenaustauschchromatographie und affinitaetschromatographische Verfahren ein 66-kDa-Protein angereichert werden. Nach Einbau der angereicherten Proteinfraktion in planare Lipiddoppelschichten wurden Kanalfluktuationen mit einem Einzelkanalleitwert von 40 pS beobachtet.
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