Culture of in vitro produced bovine embryos: effect of number of embryos and medium ratio | Cultivo de embriões bovinos produzidos in vitro: efeito do número de embriões e da proporção de meio

In the last decade the dairy and beef bovine farms had an increment in their breeding programs that include the use o ovum pick-up and in vitro production (OPU/IVP). Oocytes retrieved by OPU vary in quality and its reduced number requires appropriated culture conditions for IVP. To evaluate the effect of the number of embryos and volume of the media in the in vitro culture of bovine embryos, 1428 zygotes were cultured in groups of 5, 10 or 20 in 1, 5 or 10mL of medium. Groups of 20 oocytes matured in vitro in 200mL of TCM+rFSHh+ 10% estrus cow serum (ECS). The fertilization was performed in groups of 20 oocytes/200mL of Fert-Talp medium, for 18h with 1x10(6) spermatozoa/mL. The culture was done in SOFaaci+5%ECS for 8 days. Considering D0 as the fertilization day, the IVP was evaluated on day 2 (cleavage), day 7 (blastocyst) and in day 9 (hatching rates). The cleavage rates were higher when embryos were cultured in groups of twenty. However, it was not affected by the medium ratio of 1:1, 1:5 and 1:10. The use of 1:5 and 1:10mL of culture medium ratio showed higher embryo production rates in D7 (P<0.05) than 1:1mL proportion. The culture of 20 embryos per drop affected the blastocyst production on day 7. Likewise the hatching rates in D9 were higher with 1:5 and 1:10 than 1:1. Similarly, the hatching rates were higher in cultured of 10 or 20 embryos/drop when compared to groups of 5 embryos/drop. The reduction of embryos and the proportion of the medium volume in culture affects the development indexes on bovine embryos in vitro production.

Na última década, os produtores de leite e carne bovina incrementaram consideravelmente o uso da aspiração folicular (OPU) associada à produção in vitro de embriões (IVP). Oócitos recuperados pela OPU têm qualidade diversificada e seu número reduzido requer condições diferenciadas de cultivo para a IVP. Para determinar o efeito do número de embriões e volume de meio sobre a IVP, 1428 embriões bovinos foram cultivados em grupos de 5, 10 e 20, em 1:1, 1:5 e 1:10mL de meio. Grupos de 20 oócitos foram maturados in vitro em 200mL de TCM-199+ rFSHh+10% de soro de vaca em estro (SVE), por 24h. A fecundação in vitro foi em grupos de 20 oócitos/200mL de meio Fert-Talp, por 18h com 1x10(6) espermatozóides/mL. O cultivo foi em SOFaaci+5% SVE por 8 dias. Considerando-se o dia da fecundação como D0, conduziu-se as avaliações no D2 (clivagem), D7 (blastocistos) e no D9 (eclosão). A taxa de clivagem foi superior quando o cultivo foi com 20 embriões e não foi afetada quando a proporção de meio variou (1:1; 1:5 e 1:10). Com as proporções de meio de cultivo 1:5 ou 1:10, a taxa de embriões em D7 foi superior (P<0.05) à 1:1. O número de embriões cultivados influenciou a produção de blastocistos em D7 (P<0,05) com 20 embriões/gota. Estes resultados também se refletem nos percentuais de blastocistos eclodidos em D9, sendo que 1:5 e 1:10 foram superiores (P<0,05) à 1:1. Da mesma forma, a taxa de eclosão foi superior (P<0,05) com o cultivo de 10 ou 20 embriões/gota quando comparado ao grupo de 5 embriões/gota. A redução do número de embriões e da proporção de volume de meio no cultivo, afeta os índices de desenvolvimento na produção in vitro de embriões bovinos.