Optimization of parameters setting ELISA when designing test systems for the detection in serum of swine antibodies to M. Hyopneumoniae in pig breeding complexes

俄语. Описываются опыты по оптимизации условий обнаружения в ИФА антител к М. hyopneumoniae, способы очистки антигена и результаты ИФА по распространению серопозитивных свиней на свиноводческих комплексах Республики Беларусь. Наиболее специфичная фракция антигена М. hyopneumoniae находится в диапазоне молекулярной массы 40-100 kDa. Более высокая степень очистки антигенов М. hyopneumoniae от контаминирующих белков достигается с помощью гель-фильтрации (фракция 2 с м.м. 60 -40 kDa) и ультрафильтрации на ячейках Millipore Amicon Ultra-15 с мембраной MWCO 50 и 100 kDa (фракция 50-100 kDa), давших снижение ОП 1.8 и 1.7 соответственно. Определены оптимальные условия для выявления в ИФА антител к М. hyopneumoniae в сыворотках крови свиней: использование иммунологических панелей Enhanced binding Microtiter Assembly, сорбирование антигена при рН 7.2 в 0.02М фосфатно-солевом буфере 60 мин, введение в буферный раствор для блокировки панелей 0.5% обезжиренного молока. По результатам ИФА серопозитивные свиньи были выявлены в 20 (83.3%) комплексах, заболеваемость свиней составила 13.2-41.1%.

英语. In a course of the research there was studied optimization of parameters ELISA methods of cleaning of an antigene and results distribution of M. hyopneumpniae. The research was realized in the Republic of Belarus. As a result of realized research there was revealed that the most specific antigen of M. hyopneumoniae fraction wass in the range of molecular weight 40-100 kDa. A higher degree of purification of antigens from M. hyopneumoniae contaminating proteins was achieved by gel filtration (fraction 2 with 60 MM -40 kDa) and on ultrafiltration on cells Millipore Amicon Ultra-15 with 50 MWCO membrane and 100 kDa (fraction 50 100 kDa), which gave a decrease of OP 1.8 and 1.7 respectively. The optimal conditions for the detection in ELISA of antibodies to M. hyopneumoniae in swine serum were determined: using of immunological panels Enhanced binding Microtiter Assembly, sorption of antigen at pH 7.2 in 0.02M phosphate-buffered saline 60 min, the introduction in the buffer solution for blocking panels of 0.5% cream free milk. According to the results of IFA seropositive pigs were found in 20 (83.3%) of the complex, the incidence of pigs amounted to 13.2-41.1%.