High resolution fingerprinting of transcribed genes by means of a modified cDNA-AFLP method [Zea mays L. - amplified fragment length polymorphism]
1999
Hartings, H. (Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura, Rome (Italy))
英语. A modified cDNA-AFLP protocol was designed with the purpose to identify and recover the large majority of differentially expressed transcripts from dissimilar mRNAs pools. Three aspects of the cDNA-AFLP method were taken in consideration. First, a set of restriction enzymes was identified that allows to assess the largest possible portion of the mRNA pool. This combination of restriction enzymes, furthermore, permits simultaneous template restriction and adaptor ligation, hence reducing the occurrence of artifacts due to the joining of restricted template molecules. Finally, primers were redesigned allowing the performance of an exhaustive search for differentially expressed products (95% of the gene pool) with a relatively small number of primer combinations
显示更多 [+] 显示较少 [-]意大利语. [E' stato messo a punto un protocollo modificato cDNA-AFLP allo scopo di identificare e recuperare la gran maggioranza di trascritti espressi in maniera differenziale da pool di mRNA dissimili. Sono stati presi in considerazione tre aspetti del metodo cDNA-AFLP. In primo luogo e' stato identificato un gruppo di enzimi di restrizione che permettono di stimare la porzione piu' ampia possibile del pool di mRNA. Questa combinazione di enzimi di restrizione, inoltre, permette la simultanea restrizione della struttura e legatura dell'adattatore, riducendo pertanto il verificarsi di artefatti dovuti all'unione di molecole ristrette della struttura. Infine, sono stati ridisegnati primer che consentono la realizzazione di una ricerca esaustiva di prodotti espressi differenzialmente (95% del pool di geni) con un numero relativamente piccolo di combinazioni di primer]
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