Efecto de la Pentoxifilina o Mioinositol sobre los parámetros de motilidad, cinética y fertilidad in vitro del semen sexado y no sexado bovino criopreservado

El objetivo fue evaluar el efecto de la Pentoxifilina (PTX) y Mioinositol (MI) luego de la incubación, a las 2 horas (termorresistencia) y poscapacitación sobre la motilidad, cinética y fertilidad in vitro (FIV) del semen bovino no sexado (SN) y sexado (SX). Se realizaron 2 experimentos para los cuales se utilizó SN y SX del mismo toro y de la misma partida. 1) Se evaluó el efecto de la PTX y el MI sobre el semen utilizando el sistema CASA. Se estudiaron los parámetros de motilidad general y progresiva, velocidad y recorrido de la trayectoria circular, trayectoria recta y promedio, oscilación e hiperactivación. Se formaron 6 grupos: SN-C: SN con TCM-199; SN-PTX: SN con TCM-199 adicionado con PTX; SN-MI: SN con TCM-199 adicionado con MI; SX-C: SX con TCM-199; SX-PTX: SX con TCM-199 adicionado con PTX; SX-MI: SX con TCM-199 adicionado con MI. Todos los grupos se incubaron durante 30 minutos y se evaluaron en CASA. Se incubaron 2 horas para evaluar la termorresistencia en CASA. Se centrifugaron para su capacitación en medio Brackett & Oliphant (1975) (BO) con Cafeína y Heparina, seguido de lavado y dilución en medio BO de fertilización y evaluación en CASA. Los datos se analizaron con ANOVA, aquellos que arrojaron diferencias significativas fueron analizados con test de Student para identificar qué grupos diferían, en ambos casos, se utilizó un nivel de significación del 5%. 2) Pruebas de FIV: Se aspiraron complejos cúmulus ovocitos (COC) de folículos de 2-8mm de ovarios bovinos de menos de 5 horas de faenados, en buffer fosfato salino modificado (m-PBS), con 5% de suero fetal bovino (SFb) y antibióticos. Se seleccionaron los COC clase A. Se lavaron y cultivaron para maduración en TCM con 5% SFb y hormonas, en gotas de 100μl, 15 COC/gota, cubiertos con aceite mineral, en incubadora (a 38,5ºC, 5% de CO2 y 95% humedad) por 22 horas. Las pajuelas de semen fueron procesadas e incubadas de acuerdo a los grupos experimentales mencionados. Cada grupo fue capacitado y se estudió la concentración en cámara de Neubauer, ajustándola a 2x106 espermatozoides(esp)/ml. Los COC fueron divididos en 6 grupos de similar número e inseminados con el semen tratado de los distintos grupos (SN-C, SN-PTX, SN-MI, SX-C, SX-PTX, SX-MI). Se formaron gotas de 100μl con semen, cubiertas con aceite mineral y se cocultivaron con los COC por 18 horas. Los presuntos cigotos se lavaron, desnudaron con vortex y se cultivaron en medio CR1aa con 5% de SFb. Se evaluó el clivaje a las 48 horas. A los 7 días se evaluó el desarrollo embrionario y su calidad de acuerdo a las normas de la IETS. Se analizaron los resultados por Chi cuadrado, con significación del 5%. Como resultados del experimento 1, en incubación del SN se observó una disminución significativa (p<0,05) en la frecuencia de cruzamientos (BCF) para los tratamientos con PTX y MI. Con respecto a la evaluación realizada a las 2 horas, se evidenciaron mayores resultados en la velocidad curvilinea (VCL), velocidad de trayectoria media (VAP) e índice de hiperactivación (HAC) (p<0,05) en el semen tratado con PTX con respecto a los otros grupos experimentales. En esta misma evaluación, el índice de oscilación (WOB) mostró un resultado estadísticamente menor respecto a los demás grupos (P<0,01). Al comparar el efecto de los diferentes tratamientos sobre el SX, se halló un aumento significativo en VCL y VAP durante la incubación en los grupos tratados con MI y PTX (p<0,05). Evaluando la termorresistencia a las 2 horas fue mayor HAC (p<0,05) en el semen tratado con PTX. Los valores de motilidad progresiva para el SN durante la incubación fueron de 73,73%, 40,08%, 61,85%, con un desvío de 17,1% para el grupo control, y los adicionados con PTX y Ml respectivamente. Tras la capacitación, los valores fueron 15,2%, 10,2%, 7,17%, con un desvío de 4,06% para el grupo control, y los adicionados con PTX Y MI respectivamente; y para la termorresistencia medida a las 2 horas de incubación, los valores fueron 32,18%, 32,96%, 47,39%, con un desvío de 8,57% para los mismos grupos. Para el SX, los valores de motilidad progresiva durante la incubación fueron de 9,01%, 9,12%, 14,58%, con un desvío de 3,18%, para la capacitación 7,15%, 5,66%, 4,23%, con un desvío de 1,46%, y para la termorresistencia 13,96%, 9,42%, 7,53%, con un desvío de 3,30% para el grupo control y los adicionados con PTX y MI respectivamente. El experimento 2 demostró un mayor desarrollo embrionario a favor del uso de MI (63,8%) (p=0,02) con respecto al grupo control (42,4%), y una tendencia a mejorar sobre el uso de PTX (46,8%) (p=0,06) con el SX. Se concluye que está justificado el uso de los aditivos antes mencionados cuando se trabaje con SX.