Indução in vitro de haplóides e de poliplóides e detecção molecular de alelos da auto- incompatibilidade em maracujazeiro (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.) | Induction in vitro of haploid s and poliploids and molecular detection of self - incompatibility alleles in passion -fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.)

Os objetivos deste trabalho foram avaliar a resposta ginogênica em 11 genótipos, adequar metodologia para indução in vitro de poliplóides e detectar alelos da auto - incompatibilidade em maracujazeiro azedo ( Passiflora edulis f. flavicarpa Degener). Para avaliar os 11 genótipos, óvulos não -fertilizados foram inoculados em meio MS suplementado com as vitaminas do meio B5, 100 mg.L -1 de mio-inositol, 3% de sacarose, 5,0 mg.L -1 de 2,4 – D e 1,0 mg.L -1 de BAP e cultivado na ausência d e luz a 27°C ± 1. Na indução dos poliplóides, utilizou -se explantes de segmentos de hipocótilo (1,0 cm de comprimento) de plantas germinadas in vitro e o meio MS suplementado com agentes antimitóticos, colchicina (0, 25, 250 e 1250 μM) e orizalina (0, 5, 15 e 30 μM). A determinação do nível ploidia das plantas regeneradas e aclimatadas foi feita por meio da contagem do número de cromossomos em células metafásicas de ponta de raiz. Na detecção molecular dos alelos S da auto -incompatibilidade, reações de PCR foram conduzidas utilizando DNA genômico extraído de folhas jovens e oligonucleotídeos iniciadores específicos para os alelos-S das classes I e II. O genótipo II – 20 apresentou melhor resposta ginogênica, produzindo 21 embriões (7,0 7% dos óvulos inoculados). Na indução dos poliplóides, os meios mais adequados foram MS suplementado com colchicina a 25 μM e MS suplementado orizalina a 15 μM. A colchicina, em concentrações superiores (250 e 1250 μM) foi fitotóxica aos explantes. Os indivíduos diplóides apresentaram 2n = 2x = 18 cromossomas, enquanto os tetraplóides, 2n = 4x = 36. O número de cloroplastos por célula guarda foi eficiente indicador do nível de ploidia nesta espécie. Plantas diplóides possuem quatro cloroplastos por célula-guarda e as tetraplóides oito, em média. Utilizando- se os iniciadores específicos para os alelos -S, foi possível detectar e incluir a nível molecular, os alelos S 1 e S 3 do maracujazeiro, no subgrupo I das glicoproteínas do loco -S (SLG) das brassicas.

The objectives of this work were to evaluate the gynogenic ability of 11 genotypes, to adapt in vitro methodology for poliploidy induction and detection of self -incompatibility alleles in yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa Degener). For the evaluation of gynogenic ability, no-fertilized ovules were inoculated in a MS medium supplemented with vitamin B5, 100 mg.L -1 mio-inositol, 3 g.L -1 sucrose, 5,0 mg.L -1 2,4 - D and 1,0 mg.L -1 BAP and cultivated in dark at 27°C ± 1. For poliploidy induction, explants from hypoc otyl segments (1,0 cm length) of plants germinated in vitro were inoculated in BAD medium, supplemented with antimitotic agents: colchicine (0, 25, 250 and 1250 μM) and orizaline (0, 5, 15 and 30μM). The ploidy level of regenerated and acclimatized plants was determinated by counting the number of chromosomes at root tips metaphasic cells. For the molecular detection of self-incompatibility S-alleles, genomic DNA was extracted from young leaves and submitted to PCR reaction with specific oligonucleotides primers for the classes I and II of the S-alleles. The genotype II - 20 presented the better gynogenic ability, producing 21 embryos (7,07% of the inoculated ovules). For the induction of poliploidy, the most appropriate media were BAD supplemented with 25 μM colchicine and BAD supplemented with 15 μM orizaline. Higher concentrations of colchicine (250 and 1250 μM) were toxic to the explants. The diploid individuals presented 2n = 2x = 18 chromosomes, while the tetraploids had 2n = 4x = 36. The number of chlor oplasts in the guard-cells was an efficient indicator of the ploidy level in this species. The guard -cells had four chloroplasts in diploid plants and eight in tetraploid ones. The alleles S1 and S3 were detected at molecular level and included in the subgroup I of glicoproteins of S-locus (SLG) of the Brassica.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior