بهینهسازی کدونی و مقایسهی بیان فاکتور رشد عصبی بتا انسانی (β-NGF) بصورت نوترکیب در میزبانهای باکتریایی( BL21(DE3 و BL21(DE3)pLysS
2017
معصومه رجبی بذل | زهرا حاجی حسن | مونا سهرابی
فاکتور رشد عصبی بتا (β-NGF) برای اولین بار بدلیل نقش حیاتیاش در رشد و بقای سلولهای عصبی مورد مطالعه قرار گرفت. این پروتئین که به خانوادهی نوروتروفینها تعلق دارد در درمان بیماریهای تخریب عصبی نظیر آلزایمر دارای نقش قابل ملاحظهای میباشد. بدین منظور، β-NGF انسانی نوترکیب برای اولینبار در ایران در دو سویهی متفاوت باکتری E.coli بیان شد. از آنجاییکه β-NGF در ساختار فعال و عملکردی خود دارای سه پیوند دیسولفیدی است، محیط احیا کنندهی سیتوپلاسم E.coli برای بیان آن مناسب نمیباشد. بنابراین، محیط اکسید کنندهی پریپلاسم جهت تولید β-NGF همراه با تاخوردگی صحیح مورد توجه قرار گرفت. در این تحقیق، cDNA β-NGFانسانی بدست آمده از بانک اطلاعاتی NCBI پس از بهینهسازی کدونی و ساب کلونینگ در وکتور pET39b(+)، حاوی ژن دی سولفید ایزومراز A، به روش ترنسفورماسیون (شوک حرارتی) به سویههای BL21(DE3)pLysS و BL21(DE3) انتقال یافت. بیان همزمان با استفاده از القای پروموتر با غلظت 1 میلی مولار IPTG صورت گرفت. سپس، محتوای پروتئینی استخراج شده از دو سویهی مذکور با استفاده از تکنیکهای SDS-PAGE و دات بلات با یکدیگر مقایسه گردید. نتایج نشان دهنده بیان، بویژه در سویه باکتریایی BL21(DE3) می باشد.
显示更多 [+] 显示较少 [-]