Priprava kvantitativne molekularno biološke metode za ugotavljanje števila celic vrste Salmonella enterica
2002
Marija TRKOV | Gorazd AVGUŠTIN
Pripravili smo molekularno biološko metodo za hitro štetje bakterijskih celic iz vrste Salmonella enterica, ki temelji na kompetitivni različici verižne reakcije s polimerazo (c-PCR). Uporabili smo začetna oligonukleotida MINF in MINR-Hex, ki sta zagotavljala specifičnost metode. Notranji standard DNK smo pripravili z encimskim razrezom in lepljenjem stranskih fragmentov pomnožka gena za 16S rRNK seva S. Agona (U92197). Notranji standard DNK je imel isti prepoznavni mesti za začetna oligonukleotida kot tarčna DNK, bil pa je za 27 bp krajši. Pomnožke c-PCR smo ločevali s kapilarno elektroforezo in rezultate obdelali z regresijsko analizo. Z opisano metodo in 5 × 10–5 redčenim notranjim standardom smo lahko učinkovito ugotavljali število celic vrste S. enterica v bujonski kulturi v območju med 1,2 × 104 in 6 × 105 celic na reakcijsko mešanico. Z metodo smo v preliminarnem poskusu ugotavljali število celic seva S. Livingstone v bujonski kulturi in rezultate primerjali z rezultati indirektne števne metode. Rezultati opisane metode c-PCR so bili 2,9 krat višji od rezultatov indirektnega štetja kolonij, vendar je glede na številne prednosti opisana metoda kljub temu uporabna za hitro, specifično in dovolj natančno ugotavljanje števila celic vrste S.enterica v naravnih mikrobioloških vzorcih.
显示更多 [+] 显示较少 [-]