Distribución espacio-temporal de la proteína DLK1 durante el desarrollo hipofisario del ratón Swiss albino | Spatiotemporal distribution of DLK1 protein during the pituitary development of Swiss albino mice

DLK1 (Delta Like Non-Canonical Notch Ligand 1) es una proteína transmembrana que cuenta con una región exoplásmica conformada por seis dominios semejantes a EGF (Epidermal Growth Factor) que le otorgan la capacidad de inhibir competitivamente receptores de tipo Notch, implicada en fenómenos de diferenciación celular, entre otros procesos. Ha sido descrita la presencia de inmunorreacción para DLK1 (DLK1-ir) en las distintas poblaciones de células secretoras de la adenohipófisis del ratón adulto y se conoce su distribución en la glándula durante el desarrollo embrionario de la rata; sin embargo, no existe hasta la fecha ningún trabajo que estudie la secuencia de expresión de DLK1 durante el desarrollo hipofisario del ratón. En este Trabajo de Fin de Grado se ha estudiado la distribución de DLK1 a lo largo del desarrollo hipofisario del ratón y su relación con las células productoras de hormonas adenohipofisarias mediante el empleo de técnicas inmunohistoquímicas de inmunoperoxidasa (IP) e inmunofluorescencia (IF). Se utilizaron embriones en estadios comprendidos entre e9.5 y e19.5 además de ratones postnatales de una (p7) y dos semanas (p15). Las muestras fueron fijadas con paraformaldehído e incluidas en parafina para obtener secciones de 5 µm que se procesaron para IP y dobles marcajes por IF. Los resultados mostraron una intensa inmunorreacción para DLK1 en el estadio e9.5 tanto en la bolsa de Rathke como en la región del tubo neural correspondiente al primordio hipotalámico. DLK1-ir permaneció inalterada en todos los lóbulos de la adenohipófisis y en la neurohipófisis hasta e14.5. En los siguientes estadios del desarrollo embrionario comprendidos entre e14.5 y e19.5, DLK1-ir se vio reducida en el lóbulo intermedio. Se halló DLK1-ir en las células de los lóbulos anterior y tuberal de ratones postnatales, aunque disminuyó en los lóbulos intermedio y posterior. La IF mostró colocalización de DLK1 con todas las hormonas producidas por cada tipo celular del lóbulo anterior (ACTH, TSH, GH, FSH y PRL), así como del lóbulo intermedio (ACTH) y tuberal (TSH, FSH y PRL) de la adenohipófisis durante su diferenciación. En conjunto, nuestros resultados sugieren un papel regulador para DLK1 tanto en el desarrollo hipofisario como en la diferenciación de las distintas poblaciones de células secretoras.

DLK1 (Delta Like Non-Canonical Notch Ligand 1) is a transmembrane protein with an exoplasmic region consisting of six EGF (Epidermal Growth Factor)-like domains that give it the ability to competitively inhibit Notch receptors, involved in cell differentiation, among other processes. The presence of immunoreactivity for DLK1 (DLK1-ir) has been described in the different populations of secretory cells of the adenohypophysis of the adult mouse and its distribution in the gland during the embryonic development of the rat is known; however, the sequence of DLK1 expression during the hypophyseal development of the mouse has not been studied to date. In this Final Degree Project, we have characterized the distribution of DLK1 throughout the mouse´s pituitary development and its relationship with adenohypophyseal hormoneproducing cells employing immunohistochemical techniques of immunoperoxidase (IP) and immunofluorescence (IF). Embryos at stages between e9.5 and e19.5 as well as one (p7) and two (p15) week postnatal mice were used. Samples were fixed with paraformaldehyde and embedded in paraffin to obtain 5 µm sections that were processed for IP and double labeling by IF. The results showed intense DLK1-ir at stage e9.5 in both Rathke's pouch and in the region of the neural tube corresponding to the hypothalamic primordium. DLK1-ir remained unaltered in all lobes of the adenohypophysis and in the neurohypophysis until e14.5. At late stages of embryonic development between e14.5 and e19.5, DLK1-ir was reduced in the intermediate lobe. In postnatal mice, DLK1-ir was present in anterior and tuberal lobe cells but decreased in the intermediate and posterior lobes. The colocalization of DLK1 with all hormones produced by the anterior lobe (ACTH, TSH, GH, FSH and PRL), as well as intermediate (ACTH) and tuberal lobe (TSH, FSH and PRL) cells of the adenohypophysis during their differentiation process suggests a regulatory role for DLK1 in both pituitary development and differentiation of the secretory cell populations.