Mise en marche d’un test PCR en temps réel pour diagnostiquer la tuberculose

Biochimie appliquée

Les tests d'amplifications géniques y compris la PCR en temps réel ont révolutionné le diagnostic de la tuberculose. L’extraction automatisée d’ADN mycobactérien peut améliorer la sensibilité de ces tests. Ce travail est effectué dans le contexte d’automatiser cette extraction dans l’appareil EZ 1 Advanced XL (QIAGEN, Hilden, Allemagne). Trois échantillons extrapulmonaires et un échantillon pulmonaire ZN+ sont traités au sein de laboratoire d’analyse médical El Amel. L'ADN mycobactérien est extrait, puis amplifié par PCR en temps réel. Deux méthodes d’extraction automatisée sont utilisées la première à l’aide de kit EZ1 DNA Blood 350 μl et la deuxième via le kit EZ1 DSP virus 48. Après comparaison de protocole d’extraction manuelle qui est le plus validé pour les mycobactériesavec celles automatisées; il apparue que l’extraction à l’aide de kit EZ1 DSP virus 48 est la plus proche de celle de manuelle mais exige seulement l’application d’un simple prétraitement des échantillons par leur incubation à 95°C pendant 15 minute dans un tampon de lyse AL. Les résultats de la première méthode ont été ininterprétables tandis que les résultats de la deuxième méthode confirment la positivité de l’échantillon pulmonaire ZN+ et la négativité des autres résultats. Nous concluons que la PCR en temps réel est un outil sensible et très prometteur pour un diagnostic précoce de la tuberculose dans divers types des échantillons cliniques. L’automatisation d’extraction d’ADN mycobactérien peut être réalisée à l’aide de kit EZ1 DSP virus 48 version 4 en se précédant à un prétraitement.

لقد أحدثت اختبارات التضخیم الجیني ، بما في ذلكتفاعل البلمرة المتسلسلاللحظي ثورة في تشخیص مرض السل. یمكن للاستخلاص الآلي للحمض EZ 1 Advanced XL النوویلبكتیریا السل الرفع من دقة ھذه الاختبارات. یھدف ھذا العمل لدراسة إمكانیة مكننة ھذا الاستخلاص باستعمال جھاز في مخبر التحالیل الطبیة الأمل ورقلة. و ذلك باستخلاص الحمض النووي لكل ZN + حیث تمت معالجة ثلاث عینات غیر رئویة وعینةرئویة واحدة .((QIAGEN) EZ1 DNA Blood عینة وتضخیمھ عن طریق تقنیة تفاعل البلمرة المتسلسلاللحظي لأجل ذلك تم تجریب طریقتین للاستخلاص الآلي ، الأولى باستخدام مجموعة بعد مقارنة بروتوكول الاستخلاص الیدوي والذي یعتبر الأنسب بالنسبة لبكتیریا السل مع بروتوكولي .EZ1 DSP virus 48 kit 350 والثانیة عبر مجموعة μl ھو الأقرب إلى الیدوي ولكنھ یتطلب فقط تطبیق معالجة EZ1 DSP virus الاستخلاص الآلي المذكورین سابقا. تبین أن الاستخلاص باستخدام بروتوكول المجموعة مسبقة للعینات من خلال تسخینھا في سائل تحللي عند درجة حرارة 95 درجة مئویة مدة 15 دقیقة. نتائج الطریقة الأولى كانت غیر قابلة للتفسیر في حین تؤكد نتائج وسلبیة النتائج الأخرى. ZN الطریقة الثانیة على إیجابیة العینة الرئویة نستنتج أنتفاعل البلمرة المتسلسلاللحظیھو أداة حساسة واعدة للغایة للتشخیص المبكر لمرض السل في أنواع مختلفة من العینات. مكننة استخلاص الحمض النووي بعد معالجة مسبقة للعینات . EZ1 DSP virus لبكتیریا السل یمكن تنفیذھا باستخدام مجموعة