Objetivou-se com este trabalho detectar o DNA de Brucella spp. em amostras de sangue e de suabe vaginal ou prepucial de 80 cães sorologicamente positivos para brucelose pela prova de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), no município de Natal, estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Amostras de sangue total foram colhidas com anticoagulante (citrato de sódio) juntamente com amostras de suabe vaginal e prepucial, para extração de DNA e posterior realização da reação em cadeia da polimerase (PCR) empregando-se os primers ITS66 e ITS279. O DNA de Brucella spp. foi amplificado em seis animais, sendo um animal em ambas as amostras, dois cães em amostras de sangue e três em amostras de suabe do trato reprodutivo. Concluiu-se que a infecção por Brucella spp. está presente em cães no município de Natal, e que a detecção de DNA do agente em amostras de suabe do trato reprodutivo podem ser utilizadas como ferramenta suplementar no diagnóstico de brucelose canina.

Objetivou-se com este trabalho detectar o DNA de Brucella spp. em amostras de sangue e de suabe vaginal ou prepucial de 80 cães sorologicamente positivos para brucelose pela prova de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), no município de Natal, estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Amostras de sangue total foram colhidas com anticoagulante (citrato de sódio) juntamente com amostras de suabe vaginal e prepucial, para extração de DNA e posterior realização da reação em cadeia da polimerase (PCR) empregando-se os primers ITS66 e ITS279. O DNA de Brucella spp. foi amplificado em seis animais, sendo um animal em ambas as amostras, dois cães em amostras de sangue e três em amostras de suabe do trato reprodutivo. Concluiu-se que a infecção por Brucella spp. está presente em cães no município de Natal, e que a detecção de DNA do agente em amostras de suabe do trato reprodutivo podem ser utilizadas como ferramenta suplementar no diagnóstico de brucelose canina. | The aim of this work was to detect Brucella spp. DNA in samples of blood and vaginal or preputial swabs in 80 seropositive dogs for brucellosis by agar gel immunodiffusion test (AGID) from the county of Natal, Rio Grande do Norte State, Brazil. Whole blood samples were collected with anticoagulant (sodium citrate) and vaginal and preputial swab samples for DNA extraction and polymerase chain reaction (PCR) employing ITS66 and ITS279 primers. Six animals showed amplification of Brucella spp., being one animal in both samples, two dogs only in blood samples, and three only in reproductive tract swabs. It is concluded that infection due to Brucella spp. occurs in dogs from the county of Natal, and the detection of DNA of the agent in reproductive tract swabs may be used as complementary tool in the diagnosis of canine brucellosis.

A brucelose é uma zoonose crônica de importância para a Saúde Pública. Considerando o pequeno número de dados brasileiros sobre a sua presença em leite cru e derivados não-pasteurizados, estudamos a presença de brucelas em leite de animais sorologicamente positivos. A soroaglutinação rápida (SAR), a soroaglutinação lenta (SAL) e a soroaglutinação lenta com tratamento do soro com 2-mercaptoetanol foram utilizados para identificar os animais positivos nas propriedades estudadas. Amostras diárias de 300 ml de leite foram colhidas por três dias de todos os quartos mamários produtivos (75 ml/teto). As amostras eram misturadas e centrifugadas. Parte do sedimento e do sobrenadante foi inoculada em meios de Farrel e Brodie-Sinton (BS) suplementados com agentes antimicrobianos. As placas e tubos foram cultivados por sete dias a 37ºC, em microaerofilia. As colônias suspeitas no meio BS foram imediatamente repicadas para ágar-Brucella, e cultivadas sob a mesma condição. Os microrganismos isolados foram submetidos a procedimentos de identificação, incluindo a coloração de Gram, requerimento de CO2, produção de H2S, atividade da urease e crescimento na presença de tionina e fucsina. Das 49 amostras examinadas, isolou-se Brucella abortus de 15 (30,61%). Os biótipos isolados foram: biótipo 1 em uma amostra (2,04%), biótipo 2 em oito (16,32%) e biótipo 3 em seis amostras (12,25%)

Brucellosis is a chronic zoonosis that plays an important role in Public Health. Considering the lack of data in Brazil regarding its presence in raw milk and non-pasteurized dairy products, we determined the presence of brucellae in milk from brucellosis positive animals. The slide agglutination test (SAT), tube agglutination test (TAT) and TAT treated with 2-mercaptoethanol were used to identify positive animals in studied herds. For 3 days, 300 ml milk samples/cow (75 ml/teat) were collected from all productive quarters of the positive animals. These were mixed and centrifuged. Part of the pellet and of the supernatant were inoculated in Farrel and Brodie-Sinton (BS) media supplemented with antimicrobial agents. The inoculated plates and tubes were incubated at 37ºC for 7 days, with 10 per cent CO2 atmosphere. The suspected bacterial growth in BS media was immediately cultivated in agar Brucella media, under the same conditions. Colonies were submitted to identification procedures including Gram stain, CO2 requirement, H2S production, urease activity and growth in the presence of thionin and fuchsin. Of the 49 analysed samples, 15 (30.61%) contained Brucella abortus. The distribution was as follows: biotype 1 in one sample (2.04%), biotype 2 in eight (16.32%) and biotype 3 in six samples (12.25%). | A brucelose é uma zoonose crônica de importância para a Saúde Pública. Considerando o pequeno número de dados brasileiros sobre a sua presença em leite cru e derivados não-pasteurizados, estudamos a presença de brucelas em leite de animais sorologicamente positivos. A soroaglutinação rápida (SAR), a soroaglutinação lenta (SAL) e a soroaglutinação lenta com tratamento do soro com 2-mercaptoetanol foram utilizados para identificar os animais positivos nas propriedades estudadas. Amostras diárias de 300 ml de leite foram colhidas por três dias de todos os quartos mamários produtivos (75 ml/teto). As amostras eram misturadas e centrifugadas. Parte do sedimento e do sobrenadante foi inoculada em meios de Farrel e Brodie-Sinton (BS) suplementados com agentes antimicrobianos. As placas e tubos foram cultivados por sete dias a 37ºC, em microaerofilia. As colônias suspeitas no meio BS foram imediatamente repicadas para ágar-Brucella, e cultivadas sob a mesma condição. Os microrganismos isolados foram submetidos a procedimentos de identificação, incluindo a coloração de Gram, requerimento de CO2, produção de H2S, atividade da urease e crescimento na presença de tionina e fucsina. Das 49 amostras examinadas, isolou-se Brucella abortus de 15 (30,61%). Os biótipos isolados foram: biótipo 1 em uma amostra (2,04%), biótipo 2 em oito (16,32%) e biótipo 3 em seis amostras (12,25%)

Bovinos adultos vacinados uma ou duas vezes com 2x10(9) bactérias viáveis da amostra RB51 de Brucella abortus não reagiram sorologicamente nas provas de rosa de bengala, soro-aglutinação em tubos e mercaptoetanol. Animais vacinados durante a prenhez não abortaram e não foi isolada B. abortus das secreções vaginais ou do leite.

Adult cattle vaccinated once or twice with 2x10(9) viable B. abortus strain RB51 bacteria did not seroconvert in the rose bengal, serum agglutination and mercaptoethanol tests. Animals vaccinated while pregnant did not abort and no B. abortus was isolated from their vaginal mucus and milk. | Bovinos adultos vacinados uma ou duas vezes com 2x10(9) bactérias viáveis da amostra RB51 de Brucella abortus não reagiram sorologicamente nas provas de rosa de bengala, soro-aglutinação em tubos e mercaptoetanol. Animais vacinados durante a prenhez não abortaram e não foi isolada B. abortus das secreções vaginais ou do leite.

Foram comparados três antígenos solúveis: um hapteno nativo (NH) de B. melitensis 16M, um polissacarídeo (PS) obtido de B. abortus 1119-3 e outro polissacarídeo de cadeia O (O-Chain) originado também da última Brucella. Os testes de imunodifusão radial (RID) e imunodifusão em gel de ágar (AGID) foram confrontados com as três classes de soros bovinos: a) infectados naturalmente (n = 76), b) não infectados (n = 130) e c) vacinados com B19 (n = 61) reagindo a testes sorológicos clássicos. Foram determinadas a sensibilidade (Se), a especificidade (Sp) e a capacidade para discriminar vacinados (ADV). A Se mais alta (84,3%) no teste RID foi demonstrada pelo antígeno NH, enquanto os três antígenos tiveram 100% de Sp. O antígeno O-Chain teve 100% de ADV nesse teste. O teste AGID com estes antígenos demonstrou 100% Sp e ADV, enquanto o antígeno PS mostrou uma melhor Se (86,6%). Finalmente, por sua qualidade de produção e eficiência, os antígenos PS e NH representam uma alternativa segura e econômica para o diagnóstico suplementar da brucelose.

Three soluble antigens were compared by radial immunodiffusion (RID) and agar gel immunodiffusion (AGID) tests: a native haptene (NH) from Brucella melitensis 16M, and a polysaccharide (PS) from B. abortus 1119-3, both obtained by non-hydrolytic methods, and the (O-Chain) polysaccharide extracted also from B. abortus 1119-3 but using an hydrolytic method. Three groups of bovine sera were tested: a) Naturally infected (n = 76); b) Non-infected (n = 130) and c) S-19 vaccinated (n = 61); the sensitivity (Se), the specificity (Sp) and the ability to differentiate vaccinated (ADV) were determined in each group a, b and c respectively. The highest Se in the RID test (84.3%) was achieved by NH; while the three antigens gave 100% Sp. The O-Chain showed 100% ADV in this test. In the AGID test PS antigen showed the best Se (86.6%), and all antigens showed 100% of Sp and ADV. Finally, for its production qualities and efficiency the antigens PS and NH represent a promising alternative for complementary diagnosis of brucellosis. | Foram comparados três antígenos solúveis: um hapteno nativo (NH) de B. melitensis 16M, um polissacarídeo (PS) obtido de B. abortus 1119-3 e outro polissacarídeo de cadeia O (O-Chain) originado também da última Brucella. Os testes de imunodifusão radial (RID) e imunodifusão em gel de ágar (AGID) foram confrontados com as três classes de soros bovinos: a) infectados naturalmente (n = 76), b) não infectados (n = 130) e c) vacinados com B19 (n = 61) reagindo a testes sorológicos clássicos. Foram determinadas a sensibilidade (Se), a especificidade (Sp) e a capacidade para discriminar vacinados (ADV). A Se mais alta (84,3%) no teste RID foi demonstrada pelo antígeno NH, enquanto os três antígenos tiveram 100% de Sp. O antígeno O-Chain teve 100% de ADV nesse teste. O teste AGID com estes antígenos demonstrou 100% Sp e ADV, enquanto o antígeno PS mostrou uma melhor Se (86,6%). Finalmente, por sua qualidade de produção e eficiência, os antígenos PS e NH representam uma alternativa segura e econômica para o diagnóstico suplementar da brucelose.

Foi realizado um estudo para a determinação da prevalência sorológica de brucelose bovina no Estado da Paraíba. Seis municípios foram selecionados aleatoriamente em cada uma das três ecorregiões do Estado: a região do Agreste/Litoral (1), a região do Cariri/Curimatau (2) e a região do Sertão (3). Estes 18 municípios foram divididos em quadrantes e uma propriedade foi selecionada em cada quadrante. Foram amostradas propriedades com mais de 50 animais, o que exclui as pequenas propriedades de subsistência. Pelo menos 32 animais foram amostrados de cada rebanho, estratificados nas quatro faixas etárias seguintes: (1) no mínimo 8 animais até 6 meses de idade, (2) no mínimo 8 animais com 7 a 18 meses de idade, (3) no mínimo 8 animais com 19 a 30 meses de idade e (4) no mínimo 8 animais com mais de 30 meses de idade. Anticorpos anti-B. abortus foram observados em 8 de 18 municípios (44,44%), em 8 de 72 rebanhos (11,11%) e em 8 animais dos 2343 amostrados (0,34%). A análise dos resultados de prevalência por ecorregião do Estado não revelou diferença significativa de risco entre elas. A análise dos resultados por categorias de faixa etária também não evidenciaram diferença significativa de risco entre as mesmas. Foi observado que a brucelose está amplamente disseminada no estado embora com uma baixa prevalência animal. Estes resultados podem ser úteis no delineamento de estratégias de controle da brucelose bovina no estado da Paraíba.

A serosurvey was conducted to estimate the prevalence of bovine brucellosis in the State of Paraíba, Brazil. A random sample of six municipalities was selected from each of three ecoregions of the State: the Agreste/Litoral region (1), the Cariri/Curimatau region (2) and the Sertão region (3). These 18 municipalities were divided in quadrants and one herd was selected at random from each quadrant. The sampling scheme included herds with more than 50 bovines, which excludes small-holder subsistence livestock production. At least 32 animals were sampled within each herd, stratified in four age categories, as follows: (1) at least 8 animals under 6 months of age, (2) at least 8 animals of 7 to 18 months of age, (3) at least 8 animals of 19 to 30 months of age and (4) at least 8 animals over 30 months of age. Antibodies to Brucella abortus were observed in 8 out of 18 municipalities (44.44%),in 8 out of 72 herds included in this study (11.11%) and in 8 animals out of 2343 samples collected (0.34%). The prevalence of test positive cattle by ecoregion/cattle production regions in the state showed no significant differences of risk among them. Likewise, there was no significant difference of risk among the different age categories studied. It was observed that brucellosis is widely spread across the state albeit with low animal prevalence. These results may be used in the design of a strategy for controlling bovine brucellosis in the State of Paraíba. | Foi realizado um estudo para a determinação da prevalência sorológica de brucelose bovina no Estado da Paraíba. Seis municípios foram selecionados aleatoriamente em cada uma das três ecorregiões do Estado: a região do Agreste/Litoral (1), a região do Cariri/Curimatau (2) e a região do Sertão (3). Estes 18 municípios foram divididos em quadrantes e uma propriedade foi selecionada em cada quadrante. Foram amostradas propriedades com mais de 50 animais, o que exclui as pequenas propriedades de subsistência. Pelo menos 32 animais foram amostrados de cada rebanho, estratificados nas quatro faixas etárias seguintes: (1) no mínimo 8 animais até 6 meses de idade, (2) no mínimo 8 animais com 7 a 18 meses de idade, (3) no mínimo 8 animais com 19 a 30 meses de idade e (4) no mínimo 8 animais com mais de 30 meses de idade. Anticorpos anti-B. abortus foram observados em 8 de 18 municípios (44,44%), em 8 de 72 rebanhos (11,11%) e em 8 animais dos 2343 amostrados (0,34%). A análise dos resultados de prevalência por ecorregião do Estado não revelou diferença significativa de risco entre elas. A análise dos resultados por categorias de faixa etária também não evidenciaram diferença significativa de risco entre as mesmas. Foi observado que a brucelose está amplamente disseminada no estado embora com uma baixa prevalência animal. Estes resultados podem ser úteis no delineamento de estratégias de controle da brucelose bovina no estado da Paraíba.

Adult cattle vaccinated once or twice with 2x10(9) viable B. abortus strain RB51 bacteria did not seroconvert in the rose bengal, serum agglutination and mercaptoethanol tests. Animals vaccinated while pregnant did not abort and no B. abortus was isolated from their vaginal mucus and milk. | Bovinos adultos vacinados uma ou duas vezes com 2x10(9) bactérias viáveis da amostra RB51 de Brucella abortus não reagiram sorologicamente nas provas de rosa de bengala, soro-aglutinação em tubos e mercaptoetanol. Animais vacinados durante a prenhez não abortaram e não foi isolada B. abortus das secreções vaginais ou do leite.

Bovinos adultos vacinados uma ou duas vezes com 2x109 bactérias viáveis da amostra RB51 de Brucella abortus não reagiram sorologicamente nas provas de rosa de bengala, soro-aglutinação em tubos e mercaptoetanol. Animais vacinados durante a prenhez não abortaram e não foi isolada B. abortus das secreções vaginais ou do leite. | Adult cattle vaccinated once or twice with 2x109 viable B. abortus strain RB51 bacteria did not seroconvert in the rose bengal, serum agglutination and mercaptoethanol tests. Animals vaccinated while pregnant did not abort and no B. abortus was isolated from their vaginal mucus and milk.