A indústria de lã, leite, carne e pele de ovinos tem crescido em importância e novas biotecnologias do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que estas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é causadora de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é consequente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio. Esse quadro pode ser controlado pela presença de antioxidantes no sêmen. O sêmen foi coletado pela técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi separado em duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozoide. Seus lipídios foram extraídos por dois métodosbaseados no método Folch, Lesse Stanley modificado diferentes, utilizando clorofórmio e metanol como solventes. Após foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e escolheu-se a melhor extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozoide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oleico. Dentre os dois métodos estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a Método 1. | The sheep industry for wool, milk and meat production is of increasing importance and new technologies for assessment of semen are in course for the elucidation of male infertility causes. It is well known that damage to the sperm membrane decreases semen quality. Considering that sperm membranes are composed by a phospholipid bilayer, and that lipid peroxidation is a major cause of cell damage, studieson the lipid components of semen are relevant. Lipid peroxidation is a consequence of the reaction between lipids and reactive oxygen species. This event may be reduced in the presence of antioxidants in semen. Semen was collected with an artificial vagina and, after sperm evaluation, samples were centrifuged to separate the sample into two fractions: seminal plasma and spermatozoa pellet. Both had their lipids extracted by two different methods based on Folch, Less& Stanley method modified, using chloroform e methanol as solvents. After the extraction, some esterified fatty acids were qualified and quantified for the sensitivity and specificity to the high performance liquid chromatography in order to determine the most efficient extraction technique in quantitative and qualitative aspects. Statistical analysis was performed using SAS software for Windows. The predominant saturated fatty acid in sperm under these experimental conditions was the myristic and the most abundant insaturated fatty acid in both extractions was DHA. In seminal plasma, in both methods, the prevailing fatty acid is the saturated palmitic and the unsaturated oleic. Among the methods evaluated, we obtained the best results of identification and quantification of fatty acids in Method 1.

A indústria de lã, leite, carne e pele de ovinos tem crescido em importância e novas biotecnologias do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que estas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é causadora de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é consequente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio. Esse quadro pode ser controlado pela presença de antioxidantes no sêmen. O sêmen foi coletado pela técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi separado em duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozoide. Seus lipídios foram extraídos por dois métodosbaseados no método Folch, Lesse Stanley modificado diferentes, utilizando clorofórmio e metanol como solventes. Após foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e escolheu-se a melhor extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozoide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oleico. Dentre os dois métodos estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a Método 1.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do estresse de trabalho sobre a fertilidade de cães machos. Foram utilizados 18 cães da raça rottweiler, férteis, com idade média de 4 anos, distribuídos aleatoriamente em dois grupos: repouso (controle) e trabalho (tratamento). O tratamento era composto por 5 fases: 1-adaptação, 2- adestramento básico, 3-adestramento militar e condicionamento, 4- acampamento, 5-repouso. Durante todo o período experimental, foram feitas duas coletas de sêmen semanais, para avaliação do ejaculado. No final de cada fase foi realizada coleta de sangue para dosagem dos níveis plasmáticos de cortisol. Os dados foram analisados pelo SAS, á=5%. Observou-se efeito negativo do estresse sobre os parâmetros motilidade (72,63 vs. 57,62, p<0,0001) e vigor espermático (3,06 vs. 2,52, p<0,0001), porcentagem de defeitos maiores (16,01 vs. 26,80, p< 0,0001) e totais (29,61 vs. 40,34, p<0,0001). Observou-se interação (p<0,0001) entre tempo e tratamento sobre a variável cortisol, indicando que o tipo de agente estressante (fase) interfere no nível plasmático de cortisol. Com base nesses resultados, é possível concluir que o estresse de trabalho interferiu de maneira negativa na fertilidade dos cães. | The present work aimed to evaluate the effect of work stress male dogs fertility. Eighteen fertile male Rottweiler dogs, mean aged 4 years old, were randomly allocate into two groups: resting (control) and working (treatment). Treatment consisted of 5 working stages: 1 - adaptation, 2- basic obedience training, 3 - physical conditioning and military training, 4 - camping and 5 - resting. During the experimental period, semen was collected and evaluated twice a week. At the end of each stage, blood collections were performed in order to evaluate plasmatic levels of cortisol. Data were analyzed using the statistical software SAS (a=5%). A significant negative effect of stress was observed on sperm motility (resting=72.63 vs. working=57.62, p<0.001), progressive motility (resting=3.06 vs. working=2.52, p<0.0001), major defects (resting=16.01 vs. working=26.80, p<0.0001) and total defects (resting=29.61 vs. working=40.34, p<0.0001). Furthermore, a significant interaction (P<0.0001) was observed between treatment and working stage periods for the plasmatic levels of cortisol, suggesting that the level of stress may vary according to the type of work. Results indicated that work stress may negatively influence fertility in male dogs.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do estresse de trabalho sobre a fertilidade de cães machos. Foram utilizados 18 cães da raça rottweiler, férteis, com idade média de 4 anos, distribuídos aleatoriamente em dois grupos: repouso (controle) e trabalho (tratamento). O tratamento era composto por 5 fases: 1-adaptação, 2- adestramento básico, 3-adestramento militar e condicionamento, 4- acampamento, 5-repouso. Durante todo o período experimental, foram feitas duas coletas de sêmen semanais, para avaliação do ejaculado. No final de cada fase foi realizada coleta de sangue para dosagem dos níveis plasmáticos de cortisol. Os dados foram analisados pelo SAS, á=5%. Observou-se efeito negativo do estresse sobre os parâmetros motilidade (72,63 vs. 57,62, p<0,0001) e vigor espermático (3,06 vs. 2,52, p<0,0001), porcentagem de defeitos maiores (16,01 vs. 26,80, p< 0,0001) e totais (29,61 vs. 40,34, p<0,0001). Observou-se interação (p<0,0001) entre tempo e tratamento sobre a variável cortisol, indicando que o tipo de agente estressante (fase) interfere no nível plasmático de cortisol. Com base nesses resultados, é possível concluir que o estresse de trabalho interferiu de maneira negativa na fertilidade dos cães.

Foi o objetivo deste trabalho comparar in vitro a eficiência de três diluidores para sêmen de coelhos: solução de Ringer com lactato de sódio, um meio à base de citrato de sódio e gema de ovo e um meio à base de leite desnatado sobre a manutenção da motilidade progressiva e do vigor espermático. Para tanto, foram utilizados 5 coelhos realizando-se 10 colheitas de sêmen de cada (n = 50). O sêmen foi colhido com vagina artificial, e avaliado quanto ao volume, motilidade, vigor e concentração. O sêmen foi diluído (20x106 espermatozóides/mL) em microtubos pré-aquecidos a 37ºC nos três diluidores, e então incubados em banho-maria a 37ºC por 120 minutos, realizando-se avaliações a cada 30 minutos. Imediatamente após a diluição (tempo 0) a motilidade espermática não diferiu (P>;0,05) entre os diluidores, todavia, reduziu (P<0,05) no diluído com Ringer quando comparado ao sêmen in natura. Já o vigor no tempo 0 diminuiu (P<0,05) nos três meios. A motilidade espermática foi melhor preservada (P<0,05) durante a incubação de 30 até 120 minutos para o sêmen diluído nos diluidores citrato-gema e à base de leite do que para aquele diluído em Ringer. A preservação do vigor variou entre os diluidores durante o tempo de incubação in vitro, contudo, foi semelhante entre os três diluidores após 120 minutos de incubação. Com estes resultados, pode-se inferir que os diluidores testados proporcionam um meio que permite manter a viabilidade espermática para que possa ser realizada a inseminação artificial em coelhas até duas horas pós-diluição

The aim of this paper was verifying the effect of the Equex STM Paste and EDTA addition to a Tris-egg yolk extender, on the post-thaw goat sperm viability. Nine semen samples of two adult goats were collected by artificial vagina and cryopreserved. It was also objective of this study, to evaluate the utilization of a soybean lecithin based commercial extender (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, French) for the goat semen freezing. They were formed five experimental groups: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EDTA+EQUEX e Bioexcell. After evaluation, the semen was diluted in the five extenders and packed in 0.25mL straws with 100 million of motile spermatozoa. The samples were cooled at 0,46°C/min to 5°C, submitted at 75min of equilibration time and frozen in liquid nitrogen vapour. The thawing was accomplished in 37ºC water bath for 50s. There were no differences (P&gt;;0,05) on the means of post-thaw total and progressive sperm motility among the groups TRIS, TRIS+EQUEX and TRIS+EQUEX+EDTA. The Bioexcell group obtained the least (P&lt;0,05) percentage of post-thawing total and progressive sperm motility. After the thermotolerance test, it was observed the greatest (P&lt;0,05) rates of total and progressive sperm motility in the Equex STM groups (TRIS+EQUEX and TRIS+EQUEX+EDTA). Thus, it can be affirmed that the Equex addition promotes better maintenance rates in the pos-thaw sperm viability, when compared with the extenders that did not contain it. | Nove amostras de sêmen de dois caprinos adultos, colhidas com a utilização de vagina artificial, foram submetidas a criopreservação, com o objetivo de verificar o efeito do Equex STM Paste e do EDTA, adicionados a um diluidor a base de Tris-gema de ovo, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Também foi objetivo desse trabalho, avaliar a utilização de um diluidor comercial, a base de lecitina de soja (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, França), para a congelação do sêmen caprino. Assim, foram formados cinco grupos experimentais: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EQUEX+EDTA e Bioexcell. Logo depois da avaliação, o sêmen foi diluído nos diferentes meios e envasado em palhetas de 0,25 mL, com dose inseminante de 100 x 10(6) espermatozóides. As amostras foram submetidas ao resfriamento, com uma curva média de 0,46°C/min, até atingirem a temperatura de 5°C, mantidas por mais 75min em tempo de equilíbrio e, posteriormente, congeladas em nitrogênio líquido. A descongelação foi realizada em banho-maria a 37ºC por 50s. Não houve diferença (P&gt;;0,05) entre as médias de motilidade total e progressiva, em relação aos grupos TRIS, TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA. O grupo Bioexcell obteve o menor (P&lt;0,05) percentual de espermatozóides com motilidade total e progressiva após a descongelação. Após o teste de termoresistência, as melhores (P&lt;0,05) taxas de motilidade total e progressiva foram observadas para os grupos com Equex STM (TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA). Assim, pode-se afirmar que a adição do Equex promove uma maior manutenção das taxas de viabilidade espermática após a descongelação, quando comparado com os diluidores que não o continham.

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da vasectomia bilateral nas características seminais de macacos pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro. Foram utilizados seis animais da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral dos animais. A primeira colheita foi realizada 15 dias antes da vasectomia e as colheitas posteriores foram realizadas com intervalo de 30 dias até o momento da eliminação completa de espermatozóides do líquido seminal. Imediatamente após a ejaculação, o sêmen foi avaliado quanto suas características físicas, iniciando-se pelo volume (ml) da fração líquida e medição do pH. Posteriormente foram avaliados motilidade (%) e vigor espermático (0-5). Uma fração do sêmen foi diluída em formol salina 10%, para posterior avaliação da concentração espermática (cel/ml) e das características morfológicas (%). A integridade do acrossoma foi avaliada apenas na primeira colheita e a concentração espermática foi avaliada em apenas quatro animais na colheita antes da vasectomia devido ao fato de não haver quantidade suficiente de sêmen. Na primeira colheita após a vasectomia, todos os animais apresentaram espermatozóides com motilidade e vigor iguais a zero. No entanto, a concentração espermática pode ser avaliada até a segunda colheita pós-vasectomia, apresentando as Médias/EP 2.8±1.3 x 10(6)/ml antes da vasectomia e 4.7±1.6 e 0.8±0.7 x 10(6)/ml, após a vasectomia, respectivamente. Apenas na terceira colheita a média da concentração espermática foi igual a zero. Os resultados sugerem que machos vasectomizados devam voltar ao grupo, sem risco de fecundação acidental, após três meses da realização da vasectomia.

The effects of bilateral vasectomy on the seminal characteristics were assessed in capuchin monkeys (Cebus apella). Six adult male monkeys were housed separately in outdoor pens at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Semen samples were collected by electroejaculation, after anesthetized the animals, 15 days before and once a month from 1 to 5 months after vasectomy. Immediately after the ejaculation, semen was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigour (0-5), concentration (cells/ml), defects (%) and percentage of intact acrosoma (%). The percentage of intact acrossoma was analyzed only in the collection before the vasectomy and the concentration was done in only four males in these collection because have no semen enough for all analyses. One month after the vasectomy ejaculated spermatozoa were non-motilite and non-vigour in all vasectomized males. In addition the Mean/SEM of cells/ml before the vasectomy was 2.8±1.3 x10(6)/ml and after two months of the vasectomy was 4.7±1.6 x10(6)/ml, 0.8±0.7 x10(6)/ml, respectively. Only after the thirty month the number of cells/ml was zero. Our results suggest that the vasectomized males may be back to the group, without risks of accidental fecundating, only 3 months after vasectomy. | Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da vasectomia bilateral nas características seminais de macacos pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro. Foram utilizados seis animais da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral dos animais. A primeira colheita foi realizada 15 dias antes da vasectomia e as colheitas posteriores foram realizadas com intervalo de 30 dias até o momento da eliminação completa de espermatozóides do líquido seminal. Imediatamente após a ejaculação, o sêmen foi avaliado quanto suas características físicas, iniciando-se pelo volume (ml) da fração líquida e medição do pH. Posteriormente foram avaliados motilidade (%) e vigor espermático (0-5). Uma fração do sêmen foi diluída em formol salina 10%, para posterior avaliação da concentração espermática (cel/ml) e das características morfológicas (%). A integridade do acrossoma foi avaliada apenas na primeira colheita e a concentração espermática foi avaliada em apenas quatro animais na colheita antes da vasectomia devido ao fato de não haver quantidade suficiente de sêmen. Na primeira colheita após a vasectomia, todos os animais apresentaram espermatozóides com motilidade e vigor iguais a zero. No entanto, a concentração espermática pode ser avaliada até a segunda colheita pós-vasectomia, apresentando as Médias/EP 2.8±1.3 x 10(6)/ml antes da vasectomia e 4.7±1.6 e 0.8±0.7 x 10(6)/ml, após a vasectomia, respectivamente. Apenas na terceira colheita a média da concentração espermática foi igual a zero. Os resultados sugerem que machos vasectomizados devam voltar ao grupo, sem risco de fecundação acidental, após três meses da realização da vasectomia.

In order to verify alternative clinical approach in the reproductive evaluation of 4 adult dogs, the fine needle aspiration cytology (FNAC) and serum testosterone levels were used together with testicular volume measurement and semen analysis. FNAC was performed in both testes and serum testosterone concentrations were assayed in regular intervals during a 24h period. Results of semen analysis and FNAC were normal in dogs 1 and 3. In dog 2, small testes, poor semen quality, a high percentage of Sertoli cells and early spermatids were found suggesting testicular degeneration. In dog 4, a small right testicle, poor semen quality with low sperm concentration and an uncounted amount of spermatozoa in the FNAC indicated testicular degeneration due to an obstructive lesion; whereas high percentage of distal droplets, thicker left epididymis and normal FNAC of the left testis suggested a slow sperm transit. Testosterone circadian rhythm was clear in 3 of 4 dogs, although concentrations were low. Testicular volume, semen analysis and testicular FNAC could provide valuable information about spermatogenesis. In contrast, serum testosterone concentration was not clearly correlated with any reproductive characteristic of those dogs. | Com o objetivo de avaliar a função reprodutiva de 4 cães machos, adultos, a citologia aspirativa com agulha fina (FNAC) e as concentrações de testosterona sérica foram usadas em associação a determinação do volume testicular e análise do sêmen. FNAC foi realizada em ambos os testículos e as concentrações de testosterona foram determinadas durante 24 horas, em intervalos regulares. Os resultados da análise do semen se encontraram dentro do padrão para a espécie nos cães 1 e 3. O cão 2 apresentou testículos pequenos, baixa qualidade seminal, alta porcentagem de células de Sertoli e espermátides iniciais sugerindo uma degeneração testicular. No cão 4 observou-se uma degeneração testicular do lado direito conseqüência de um processo obstrutivo mostrada pela diminuição do testículo, baixa qualidade do sêmen evidenciada pela baixa concentração espermática e incontável número de espermatozóides na FNAC; uma diminuição do trânsito espermático foi observada no testículo esquerdo, com espessamento do epidídimo, alta porcentagem de gotas distais na análise seminal, porém resultados normais na FNAC. O ritmo circadiano da testosteronafoi claro nos cães 3 e 4, entretanto as concentrações encontraram-se próximas ao limite inferior. O volume testicular, a análise do sêmen e a FNAC testicular podem fornecer informações valiosas sobre a espermatogênese. Entretanto, as concentrações séricas de testosterona não são claramente correlacionadas as características reprodutivas nesses cães.

Nine adult males of capuchin monkey (Cebus apella) were electro-ejaculated with a rectal bipolar probe under general anaesthesia with tiletamine -zolazepan association. From the obtained ejaculate, we only analysed the liquid fraction in order to avoid any kind of chemical treatment to attain dissolution of the seminal coagulum. The mean obtained volume was 0,2ml with the sperm concentration of 56.169 x 10(6) sperm/ml and mean motility 68,4% and vigor 2,6. The mean percentage of morphologic normal spermatozoa was 39%. The technique was efficient for semen collection in Cebus apella and allowed seminal evaluation without possible sperm lesions caused by chemical treatment for coagulum dissolution. | Foram submetidos a eletro-ejaculação 9 macacos-prego, adultos, pertencentes à Fundação Parque Zoológico de São Paulo, com o uso de eletrodo retal bipolar, sob anestesia geral obtida pela aplicação da associação tiletamina-zolazepan. Do sêmen assim obtido foram analisadas apenas as frações líquidas resultantes após a coagulação do ejaculado, não havendo nenhum tratamento químico para sua dissolução, apenas a separação das frações após a ejaculação. O volume médio obtido foi de 0,2ml, a concentração média de 56.169 x 10(6) espermatozóides/ml, com motilidade média de 68,4% e vigor médio de 2,6.O percentual médio de espermatozóides morfológicamente normais foi de 39%. A técnica é eficiente em macacos-prego (Cebus apella) e estes resultados permitem a avaliação do sêmen evitando-se os danos causados pela dissolução química do coágulo seminal.