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Ovarian follicular dynamic and embryo production seasonality in Guzerá heifers breed | Sazonalidade na dinâmica folicular ovariana e produção embrionária em novilhas da raça Guzerá
2007
Reubes Valério da Gama Filho | Francisco Aloizio Fonseca | Vanessa Gomes Ueno | Reginaldo da Silva Fontes | Célia Raquel Quirino | José Leonardo Gualberto Ramos
The objective was to verify the effects of seasonality on ovarian follicular dynamic and evaluate the influence of heat stress on early embrionic development in Guzerá heifers. Six animals were sincronized and the estrus day was considered D0. Follicular dynamic was followed by two consecutive estrous cycles, at times 1 (summer) and 2 (winter), using an ultrasonographic Scanner 200 Vet (Pie Medical). After nine days of the end of second estrous cycle, all the animals were submitted to superovulatory treatment, with duration of four days. The animals were artificially inseminated, 12 to 24 hours after estrus detection. Embryo collection was realized seven days after the first insemination. There was seasonal effect on the number of follicular waves, with a greater prevalence of cycles with one wave in the summer. The intervals between estrus and ovulations showed a greater duration in the summer. There was a significant effect of time on the duration of the ovulatory follicle growth that was longer in the summer. The follicular growth rate was smaller in the summer. Rectum temperature oscillated between times, become evident the influence (P < 0.05) of season on the internal body temperature. The THI observed on summer was 94 and winter was 86, these values suggest the animal stress condition. The number of viable structures was higher in winter, suggesting the effects on time 2 on fertilization of the oocytes. Progesterone concentrations did not have seasonal effect. Thermal stress alterations on follicular dynamic, such do reduced follicular growth rate and increase on duration of follicular growth. Might prejudice the quality of oocyte and affect the subsequent corpus luteum functionality. | Objetivou-se avaliar os efeitos da sazonalidade sobre a dinâmica folicular ovariana e analisar a influência de temperaturas elevadas no desenvolvimento embrionário inicial em novilhas da raça Guzerá. Seis animais foram sincronizados e o dia do estro foi considerado D0. A dinâmica folicular foi acompanhada por dois ciclos estrais consecutivos, na época 1 (verão) e 2 (inverno), utilizando-se um ultra-som Scanner 200 Vet (Pie Medical). Após nove dias do término do segundo ciclo estral, todos os animais iniciaram o tratamento superovulatório, com duração de quatro dias. Os animais foram inseminados artificialmente, 12 e 24 horas após a detecção do estro. A coleta dos embriões foi realizada sete dias após a primeira inseminação. Houve efeito sazonal no número de ondas foliculares, com maior prevalência de ciclos com uma onda no verão. O intervalo estral e ovulatório apresentaram maior duração no verão. Foi encontrado efeito significativo de época sobre a duração do crescimento do folículo ovulatório, ocorrendo maior persistência no verão. A taxa de crescimento folicular foi menor no verão. A temperatura retal oscilou entre as épocas, evidenciando a influência (P< 0,05) da estação do ano sobre a temperatura corporal interna. O THI (índice de temperatura e umidade) observado no verão foi 94 e no inverno 86, sugerindo a condição de estresse dos animais. O número de estruturas viáveis foi maior na época 2, sugerindo os efeitos de época sobre a fertilização dos oócitos. As concentrações de progesterona não apresentaram efeito de época. As alterações na dinâmica folicular em decorrência do estresse térmico, tais como, taxa de crescimento folicular diminuída e aumento na duração do crescimento folicular, podem comprometer a qualidade do oócito e afetar a subseqüente funcionalidade do corpo lúteo.
显示更多 [+] 显示较少 [-]Superovulation in Moxotó goats with FSH-p | Superovulação em caprinos da raça Moxotó com FSH-p
2000
Alice Andrioli | Aurino Alves Simplício | José Antônio Visintin | Adriana Trindade Soares
The aim of the work was to evaluate the rates of estrous, superovulatory response and embryos recovery in Moxotó goats after three treatments with porcine FSH. Twenty goats were synchronised with medroxyprogesterone acetate sponges (60 mg for 11days) and cloprostenol (l00 mug on ninth day). The animals were superovulated with 250 IU of FSH-p in 8 decreasing doses at intervals of 12 hours. The repetition of superovulatory treatment decreased estrous symptoms, but didnt affect the ovulation rate and decreased the regressed corpus luteum rate. The embryos recovery was affected by regressed corpus luteum and embryo collection technique. | O objetivo deste trabalho foi avaliar as taxas de manifestação de sintomas de estro, de resposta superovulatória e de recuperação de embriões em 20 cabras da raça Moxotó em três tratamentos consecutivos, em intervalos de 56 dias. O ciclo estral das fêmeas foi sincronizado com esponjas vaginais contendo 60 mg de acetato de medroxiprogesterona (MGA) durante 11 dias e com 100 mig de cloprostenol (PGF2alfa ) administrado no nono dia. Neste dia, iniciou-se o tratamento superovulatório com 250 UI de FSH-p por cabra, fracionadas em oito doses decrescentes, com intervalo de 12 horas. A repetição do tratamento superovulatório com FSH-p diminuiu a taxa de manifestação de sintomas de estro, porém não afetou a taxa de ovulação e reduziu a taxa de regressão prematura de corpos lúteos. A taxa de recuperação de embriões foi influenciada pela ocorrência de regressão prematura de corpos lúteos e pela ação das repetidas colheitas de embriões sobre o genital. Não foi possível avaliar o efeito das repetidas superovulações sobre a taxa de recuperação de embriões.
显示更多 [+] 显示较少 [-]Superovulação em caprinos da raça Moxotó com FSH-p
2000
Alice Andrioli | Aurino Alves Simplício | José Antônio Visintin | Adriana Trindade Soares
O objetivo deste trabalho foi avaliar as taxas de manifestação de sintomas de estro, de resposta superovulatória e de recuperação de embriões em 20 cabras da raça Moxotó em três tratamentos consecutivos, em intervalos de 56 dias. O ciclo estral das fêmeas foi sincronizado com esponjas vaginais contendo 60 mg de acetato de medroxiprogesterona (MGA) durante 11 dias e com 100 mig de cloprostenol (PGF2alfa ) administrado no nono dia. Neste dia, iniciou-se o tratamento superovulatório com 250 UI de FSH-p por cabra, fracionadas em oito doses decrescentes, com intervalo de 12 horas. A repetição do tratamento superovulatório com FSH-p diminuiu a taxa de manifestação de sintomas de estro, porém não afetou a taxa de ovulação e reduziu a taxa de regressão prematura de corpos lúteos. A taxa de recuperação de embriões foi influenciada pela ocorrência de regressão prematura de corpos lúteos e pela ação das repetidas colheitas de embriões sobre o genital. Não foi possível avaliar o efeito das repetidas superovulações sobre a taxa de recuperação de embriões.
显示更多 [+] 显示较少 [-]Embryotransfer in Simmental cows in northwest Paraná and South of Mato Grosso do Sul | Transferência de embrião em vacas da raça Simental na região noroeste do Paraná e Sul do Mato Grosso do Sul
1998
Estefano DEMCZUK | Luiz Ernandes KOZICKI | Edilson Santos PONTELLI | Jackson Oliveira SALLES
Simmental cows from northwest of the Paraná State and south of Mato Grosso do Sul, were used. A superovulation of donors’ cows was induced with FSH, and for embryos inovulation in recipient cows, the surgical method was used. Hundred and three recovered ova were employed and 749 recipients cows were utilized. From 1014 recovered embryos, 81.8% were transferred and the remaining embryos were frozen or rejected. The number of embryos recovered per cow averaged 9.8 ± 6.6 and transferred 8.0, resulting in 3.8 pregnancies per recovery. There were 4.8% of recoveries without embryos and 1.9 % of unfertilized ova. Middle and larger Corpora lutea in the recipients cows, had a significant influence on the pregnancy rate in relation to the smaller (p<0.05) and 64.0% of recipients cows had the ovulation on the right ovary. The pregnancy rate relative to the estrus synchronization between donors and receptors cows was higher between days + 2 and -2 (p>;0.05) (the + sign indicates that the oestrus in the recipient started after that in the donor and vice versa), being very poor after this time. Embryos classified as very good and good and inovulated, influenced significantly the pregnancy rate. The general pregnancy rate was 47.0%. | No experimento foram utilizadas vacas da raça Simental procedentes de fazendas das Regiões Noroeste do Estado do Paraná e Sul do Mato Grosso do Sul, administrando-se o hormônio folículo estimulante (FSH) para a superovulação e utilizando-se o método cirúrgico para a inovulação dos embriões nas receptoras. No total foram efetuadas 103 colheitas e utilizadas 749 vacas receptoras. Foram colhidos 1.014 embriões sendo 81,8% destes transplantados e os restantes congelados ou rejeitados. Colheram-se em média 9,8 embriões por doadora sendo 8,0 transplantados, proporcionando 3,8 animais prenhes por colheita. Ocorreram 4,8% de colheitas sem embrião e 1,9% de óvulos não-fertilizados. Relativamente ao tamanho do corpo lúteo (CL) palpado nas vacas receptoras, os dados demonstraram que os Corpora lutea de médio e maior tamanho tiveram significativa influência sobre a taxa de prenhez em relação aos de menor tamanho (p<0,05) e 64,0% das receptoras ovularam no ovário do lado direito. A taxa de prenhez em relação à sincronia de estro entre doadoras e receptoras foi mais elevada entre os dias mais 2 e menos 2 (p>;0,05) (o mais significa que o estro nas receptoras ocorreu após o da doadora e vice-versa), sendo muito baixa além destes limites. Os embriões classificados como ótimos e bons e inovulados influíram significativamente sobre o percentual de prenhez, e o total geral da taxa de gestação foi de 47,0%.
显示更多 [+] 显示较少 [-]Transferência de embrião em vacas da raça Simental na região noroeste do Paraná e Sul do Mato Grosso do Sul
1998
Estefano Demczuk | Luiz Ernandes Kozicki | Edilson Santos Pontelli | Jackson Oliveira Salles
No experimento foram utilizadas vacas da raça Simental procedentes de fazendas das Regiões Noroeste do Estado do Paraná e Sul do Mato Grosso do Sul, administrando-se o hormônio folículo estimulante (FSH) para a superovulação e utilizando-se o método cirúrgico para a inovulação dos embriões nas receptoras. No total foram efetuadas 103 colheitas e utilizadas 749 vacas receptoras. Foram colhidos 1.014 embriões sendo 81,8% destes transplantados e os restantes congelados ou rejeitados. Colheram-se em média 9,8 embriões por doadora sendo 8,0 transplantados, proporcionando 3,8 animais prenhes por colheita. Ocorreram 4,8% de colheitas sem embrião e 1,9% de óvulos não-fertilizados. Relativamente ao tamanho do corpo lúteo (CL) palpado nas vacas receptoras, os dados demonstraram que os Corpora lutea de médio e maior tamanho tiveram significativa influência sobre a taxa de prenhez em relação aos de menor tamanho (p<0,05) e 64,0% das receptoras ovularam no ovário do lado direito. A taxa de prenhez em relação à sincronia de estro entre doadoras e receptoras foi mais elevada entre os dias mais 2 e menos 2 (p>;0,05) (o mais significa que o estro nas receptoras ocorreu após o da doadora e vice-versa), sendo muito baixa além destes limites. Os embriões classificados como ótimos e bons e inovulados influíram significativamente sobre o percentual de prenhez, e o total geral da taxa de gestação foi de 47,0%.
显示更多 [+] 显示较少 [-]Perfis endócrinos e taxa de ovulação de vacas superovuladas com FSH após imunização passiva contra líquido folicular bovino livre de esteróides
1998
Rafael Herrera Alvarez | João Batista Pereira de Carvalho | Alzira Rosa e Silva | Cibele Nunes Perone | Maria Tereza Carvalho Pinto Ribela | Enoch Borges de Oliveira Filho
Dez vacas multíparas, secas, foram distribuídas aleatoriamente em dois grupos de cinco animais cada. Nos dias 8 a 12 do diestro, o primeiro grupo recebeu 100 ml de anti-soro contra líquido folicular livre de esteróides (anti-LFb) produzido em ovelhas ovariectomizadas. O segundo grupo (controle) recebeu 100 ml de soro de ovelhas não-imunizadas. Seis horas após a aplicação, os dois grupos foram superovulados com FSH (18 NIH-FSH-S1 unidades) e LH (0,29 NIH-LH-S1 unidades) administrados em quantidades decrescentes durante quatro dias. Na manhã do terceiro dia, foi administrada uma dose luteolítica de cloprostenol. Duas inseminações foram realizadas 48 e 60 horas após. Os embriões foram recuperados pelo método cervical 7 dias após a primeira inseminação. Amostras de sangue foram coletadas durante todo o período experimental para determinar, por radioimunoensaio, as concentrações plasmáticas de FSH, LH e progesterona. Todas as vacas do grupo imunizado e 3 do grupo controle apresentaram mais de 2 CL. Não existiu diferença significativa (P>;0,05) na taxa de ovulação entre os grupos imunizado e controle (14,4 e 9,9, respectivamente). O número de embriões recuperado não foi significativamente diferente (P>;0,05) entre os grupos, embora o grupo imunizado tenha apresentado maior número de embriões transferíveis (3,4 ± 1,0 versus 0,8 ± 0,4, P<0,05). As concentrações de gonadotrofinas plasmáticas não foram correlacionadas com a taxa de ovulação ou com o número de embriões recuperados. As concentrações de progesterona plasmática foram positivamente correlacionadas (r = 0,88, P<0,01) com a taxa de ovulação. Os resultados sugerem que o anti-LFb, aplicado antes da superovulação, não reduz a variabilidade da resposta ovariana.
显示更多 [+] 显示较少 [-]Efeito de diferentes gonadotrofinas sobre o crescimento folicular e a ovulação na cobaia (Cavia porcellus)
1996
Jefferson Aparecido Guilén Soares | Valquiria Hvppólito Barnabe | José Antonio Visintin | Edwiges Maristela Fituco | Renato Campanarut Barnabe | leda Terezinha Nascimento Verreschi
Para estudar a resposta superovulatória em cobaias, frente a vários esquemas de tratamentos com diferentes gonadotrofinas, foram utilizadas 60 fêmeas, divididas em 10 grupos de 6 animais cada um. Em uma 1a fase, formada por 6 grupos, cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: PMSG; FSH-p em dose única; FSH-p em 3 doses; FSH-h; HMG e solução de NaCI 0,9% (grupo controle), respectivamente. Numa 2ã fase, constituída por 4 grupos, cada um recebeu 22 Ul de FSH-h, 15 Ul de FSH-h; HMG e solução de NaCI 0,9% (grupo controie), respectivamente. Nos 3 grupos experimentais da 2a fase foi aplicada também PGF2alfa. Todos os grupos, com exceção dos 2 controles, receberam também HCG. Os 3 primeiros grupos da 1a fase tiveram ovulação bloqueada, sendo que a PMSG causou luteinização generalizada dos folículos e as demais gonadotrofinas induziram luteinização folicular precoce com aprisionamento dos óvulos. Na 2a fase, obteve-se um número médio de ovulações em um grupo e a superovulação de 2 animais. Concluiu-se que a PGF2alfa particpa dos mecanismos de ovulação na cobaia e que é possível obter aumento do crescimento folicular múltiplo com o emprego de FSH-h + HCG e HMG + HCG, associados ou não à PGFsalfa.
显示更多 [+] 显示较少 [-]Holstein and Simmental fresh embryos transfer efficacy | Eficácia da transferência de embriões a fresco oriundos de bovinos das raças Holandesa e Simental
1990
Alicio Martins Junior | Oziel Bizutti | Douglas Brasil Nogueira Gaeti | Renato Campanarut Barnabe
<p>The efficacy of transferred fresh embryos was evaluated. Donors were superovulated on day 10 of the estrous cycle with 8, 7, 5 e 4 mg (48 mg) or 7, 6,4 e 3 mg (40 mg) of follicle stimulating hormonepituitary (FSH-P) twice a day, during four days. Analogue prostaglandin (cloprostenol) was injected on day 12 of the cycle and inseminations with frozen semen two or three times were performed, each 12 hours. Nonsurgical recovery of the embryos was performed with "Neustad a.d. Aisch" catheter, introducing the medium into the uterine horns with syringes. The uterine horns were flushed with modified Dulbecco's phosphate buffered saline (PBS) enriched with 1% of foetal calf serum at 36 °C. After the recovery, the embryos were morphologically evaluated under a stereomicroscope at 16x and 70x magnifications. The embryos transfers were surgically conducted through flank incision and pregnancy diagnosis made through rectal palpation on day 45-60after transfer. Two hundred twenty one embryos from Holstein cows and thirty seven from Simmental were transferred to two hundred fifty eight cross bred heifers. Pregnancy rates for fresh embryo transfer from Holstein and Simmental cows were 73.3% and 83.3%the values were not statistically different.</p> | <p>Este trabalho foi conduzido com o propósito de se verificar a eficácia da transferência de embriões bovinos a fresco. Para tanto, vacas doadoras foram superovuladas a partir do 10º dia do ciclo estral com FSH-P na dose de 40 ou 48 mg, via intramuscular, em duas doses diárias decrescentes, por quatro dias, seguida da administração de Cloprostenolno 12º dia do ciclo e duas a três inseminações, a intervalos de 12 horas, quando no cio. Os embriões foram recuperados através de lavagem uterina no 7º dia após o cio, sendo cada corno uterino lavado com 300 a 400 ml de Dulbecco modificado (PBS), enriquecido com1% de soro fetal bovino. Após análise morfológica sob lupa estereoscópica, os embriões foram transferidos cirurgicamente, via incisão para-lombar, para o corno uterino de receptoras previamente selecionadas. Um total de 258 embriões, sendo 221 de doadoras da raçaHolandesa e 37 da raça Simental, foram transferidos para 258 novilhas que, decorridos 45 a 60 dias da transferência, foram palpadas, por via retal, para constatação da prenhez. Foram observados, respectivamente, para embriões de vacas Holandesas e Simentais, 73,3% e 83,3% de gestações, diferença estatisticamente não significante.</p>
显示更多 [+] 显示较少 [-]Endocrine profiles and ovulation rate of cows superovulated with FSH following passive immunization against steroid free-bovine follicular fluid | Perfis endócrinos e taxa de ovulação de vacas superovuladas com FSH após imunização passiva contra líquido folicular bovino livre de esteróides
1998
Rafael Herrera ALVAREZ | João Batista Pereira de CARVALHO | Alzira ROSA E SILVA | Cibele Nunes PERONE | Maria Tereza Carvalho Pinto RIBELA | Enoch Borges de OLIVEIRA FILHO
Ten multiparous non-lactating cows were randomly assigned to one of two groups. On days 8 to 12 after estrus, the first group was given 100 ml antiserum against steroid-free bovine follicular fluid (anti-bFF), which was produced in ovariectomized sheep. The second group (control) was given 100 ml nonimmune ovariectomized sheep serum. Six hours after injection, both groups were superovulated with FSH (18 NIH-FSH-S1 units) and LH (0.29 NIH-LH-S1 units) in a 4-day decreasing regime. On the morning of the third day a luteolytic dose of prostaglandin F2alpha analogue (cloprostenol) was given. Artificial inseminations (AI) were done 48 and 60 h later. Embryos were collected 7 days after AI by a nonsurgical method. Blood samples were taken throughout the experimental period and plasma concentrations of FSH, LH and progesterone were determined by radioimmunoassay. All cows from the immunized group, and 3 out of 5 cows in the control group, had more than 2 CL. There was no significant difference (P>;0.05) in the ovulation rate between immunized and control groups (14.4 and 9.9, respectively). The number of recovered embryos was not significantly different (P>;0.05) between groups, although cows immunized against bFF had a greater number of transferable embryos (3.4 ± 1.0 versus 0.8 ± 0.4, P<0.05). Plasma gonadotrophin concentrations were not correlated with either ovulation rate or number of recovered embryos. Plasma progesterone concentration was positively correlated (r = 0.88, P<0.01) to ovulation rate. Results suggested that passive immunization of cows with anti-bFF before superovulation did not reduce the variability of ovarian response. | Dez vacas multíparas, secas, foram distribuídas aleatoriamente em dois grupos de cinco animais cada. Nos dias 8 a 12 do diestro, o primeiro grupo recebeu 100 ml de anti-soro contra líquido folicular livre de esteróides (anti-LFb) produzido em ovelhas ovariectomizadas. O segundo grupo (controle) recebeu 100 ml de soro de ovelhas não-imunizadas. Seis horas após a aplicação, os dois grupos foram superovulados com FSH (18 NIH-FSH-S1 unidades) e LH (0,29 NIH-LH-S1 unidades) administrados em quantidades decrescentes durante quatro dias. Na manhã do terceiro dia, foi administrada uma dose luteolítica de cloprostenol. Duas inseminações foram realizadas 48 e 60 horas após. Os embriões foram recuperados pelo método cervical 7 dias após a primeira inseminação. Amostras de sangue foram coletadas durante todo o período experimental para determinar, por radioimunoensaio, as concentrações plasmáticas de FSH, LH e progesterona. Todas as vacas do grupo imunizado e 3 do grupo controle apresentaram mais de 2 CL. Não existiu diferença significativa (P>;0,05) na taxa de ovulação entre os grupos imunizado e controle (14,4 e 9,9, respectivamente). O número de embriões recuperado não foi significativamente diferente (P>;0,05) entre os grupos, embora o grupo imunizado tenha apresentado maior número de embriões transferíveis (3,4 ± 1,0 versus 0,8 ± 0,4, P<0,05). As concentrações de gonadotrofinas plasmáticas não foram correlacionadas com a taxa de ovulação ou com o número de embriões recuperados. As concentrações de progesterona plasmática foram positivamente correlacionadas (r = 0,88, P<0,01) com a taxa de ovulação. Os resultados sugerem que o anti-LFb, aplicado antes da superovulação, não reduz a variabilidade da resposta ovariana.
显示更多 [+] 显示较少 [-]Effect of différente gonadotrophins on the follicular development and ovulation in guinea pig (Cavia porcellus) | Efeito de diferentes gonadotrofinas sobre o crescimento folicular e a ovulação na cobaia (Cavia porcellus)
1996
Jefferson Aparecido Guilén SOARES | Valquiria Hvppólito BARNABE | José Antonio Visintin | Edwiges Maristela FITUCO | Renato Campanarut BARNABE | leda Terezinha Nascimento VERRESCHI
Superovulatory response in guinea pigs submitted to various gonadotrophins was studied in 60 females, equally divided in 10 groups with 6 animals each. In a first phase, each one of 6 groups received PMSG, FSH-p in a single dosis, FSH-p in 3 doses, FSH-h, HMG and NaCI 0.9% (control group), respectively. In a second phase, 4 groups received each one, 22 IU FSH-h, 15 IU FSH-h, HMG and NaCI 0.9% (control group), respectively. Three experimental groups of 2nd. phase also received PGF2alfa. Except for the 2 controls, all groups also received HCG. The 3 first groups of 1st phase presented blocked ovulation. The PMSG-treated group showed generalized luteinization of the ovaries, and the others had<br />early folicular luteinization with entrapment of ova. In 2nd phase, a group showed an average number of ovulations - considered as normal for the species - and 2 animals had superovulations. It may be concluded that PGF2alfa takes part in the ovulation mechanism of guinea pigs and that it is possible to increase multiple follicular development by using FSH-h + HCG and HMG + HCG associated or not with PGF2alfa.<br /> | Para estudar a resposta superovulatória em cobaias, frente a vários esquemas de tratamentos com diferentes gonadotrofinas, foram utilizadas 60 fêmeas, divididas em 10 grupos de 6 animais cada um. Em uma 1a fase, formada por 6 grupos, cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: PMSG; FSH-p em dose única; FSH-p em 3<br />doses; FSH-h; HMG e solução de NaCI 0,9% (grupo controle), respectivamente. Numa 2ã fase, constituída por 4 grupos, cada um recebeu 22 Ul de FSH-h, 15 Ul de FSH-h; HMG e solução de NaCI 0,9% (grupo controie), respectivamente. Nos 3 grupos experimentais da 2a fase foi aplicada também PGF2alfa. Todos os grupos, com exceção dos 2<br />controles, receberam também HCG. Os 3 primeiros grupos da 1a fase tiveram ovulação bloqueada, sendo que a PMSG causou luteinização generalizada dos folículos e as demais gonadotrofinas induziram luteinização folicular precoce com aprisionamento dos óvulos. Na 2a fase, obteve-se um número médio de ovulações em um grupo e a superovulação de 2 animais. Concluiu-se que a PGF2alfa particpa dos mecanismos de ovulação na cobaia e que é possível obter aumento do crescimento folicular múltiplo com o emprego de FSH-h + HCG e HMG + HCG, associados ou não à PGFsalfa.<br />
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