The major cause of infection in animal prion diseases is thought to be consumption of prion-contaminated stuff. There is evidence that the enteric nerve system (ENS) and gut-associated lymphoid tissues (GATL) are involved in the establishment of prion infection through alimentary tract. To elucidate the initial entry port for prion, we inoculated prion to alymphoplasia (aly) mice showing a deficiency in systemic lymph nodes and Peyer's patches. The aly/aly mice were susceptible to prion infection by intra-cranial inoculation and there were no differences in incubation periods between aly/aly mice and wild-type C57BL/6J mice. Incubation periods in aly/aly mice were about 20 days longer than those in C57BL/6J mice with the intra-peritoneal inoculation. The aly/aly mice were completely resistant to prion infection by per os administration, while C57BL/6J mice were sensitive as they entered the terminal stage of disease around 300 days post inoculation. PrPsup(sc) were detected in the intestine and spleen of C57BL/6J mice inoculated with prion intra-peritoneally or orally; however PrPsup(sc) was not detected in the spleen and intestine of aly/aly mice. Prion infectivity was detected in the intestines and spleens of prion-inoculated C57BL/6J mice, even after the early stages of ex-posure, while no infectivity was detected in these tissues of prion-inoculated aly/aly mice. No apparent differences were observed in the organization of the enteric nerve system between wild-type and aly/aly mice. These results indicate that GALT rather than ENS acts as the primary entry port for prion after oral exposure.

In genome sequencing project, we encounter the DNA regions that often contain stable secondary structure with high GC content. These regions are difficult to not only amplify by PCR for template preparations, but also deter mine the DNA sequences using standard Cycle sequencing (CS) method. Transcriptional sequencing (TS) is a unique DNA sequencing method using RNA polymerase, and is based on the principles of the chain-termination method, which is a powerful method to analyze GC-rich sequences. In this study, we examined the multiple displacement amplification (MDA) to overcome low efficiency of PCR amplification in GC-rich regions and subjected to TS reaction. Combination of MDA and TS (MDA-TS) was extremely successful with GC content ranging from 65 % to 85%, which are difficult to analyze with PCR and CS. We also report plasmid vector, pTS1, which has the stronger T7 and T3 promoters than those of conventional vectors, and the sequence that decreases transcriptional efficiency was removed from its multiple cloning sites. pTS1 resulted in the improved sequencing accuracy and reduced reaction time up to 5 min. These results showed that MDA-TS is a rapid and accurate method for the analysis of GC-rich templates.

We examined whether Bovine leukemia virus (BLV) was transmitted by rectal palpation using a common sleeve between a BLV-infected cow and BLV- negative steers. Three of four steers developed antibodies against BLN as determined by agar-gel immunodiffusion (AGID) test between 7 to 10 weeks after the first rectal palpation using common sleeves from BLV-infected cow. In the steers, BLV proviral DNA were detected by PCR 1 to 5 weeks earlier than detection of the antibodies by the AGID test. Our experiments demonstrated that rectal palpation is a potential cause of BLV spread in herds and that detection of BLV proviral DNA in cattle by PCR is useful screening test for early diagnosis of BLV infection.

To develop ELISA to detect antibodies specific to Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (M. paratuberculosis), the carboxyl termini of the 34 kDa proteins of M. paratuberculosis and Mycobacterium avium subsp. avium (M. avium) were expressed in Escherichia coli expression system. Antibodies specific to M. paratuberculosis were detected with the truncated 34 kDa protein of M. paratuberculosis in ELISA after pre-absorption of serum samples with the truncated 34 kDa protein of M. avium. All the serum samples from cattle confirmed to be infected with M. paratuberculosis were positive and those from healthy cattle were negative in the present ELISA system. These results indicate that the established ELISA detects antibodies specific to M. paratuberculosis with high specificity and sensitivity and is an useful tool for the screening of Johne's disease.

The mitochondrial DNA control region of the sun bear (Helarctos malayanus) was sequenced using 21 DNA samples collected from confiscated sun bears to identify conservation units, such as evolutionarily significant units and management units, in Sarawak, Borneo Island. A total of 10 haplotypes were observed, indicating the presence of at least two lineages in the sun bear population in Sarawak. Presumably, these two lineages could represent evolutionarily significant units. However, the geographical distributions of the two lineages remained unknown due to the lack of information regarding the exact capture locations of the confiscated sun bears. It is essential to elucidate the geographical distributions of these lineages in order to create a proper conservation plan for the sun bears in Sarawak. Therefore, further studies examining the haplotype distributions using DNA samples from known localities are essential.

Foram estimados, neste estudo, parâmetros relacionados à dinâmica populacional canina no Município de Ibiúna, Estado de São Paulo, para animais domiciliados, recolhidos e eutanasiados, no período de 1998 a 2002. Os dados foram obtidos a partir de fichas de cães recolhidos e eutanasiados junto ao Departamento de Zoonoses do município e também através de censos da população canina domiciliada, com levantamentos feitos casa a casa, durante as campanhas anti-rábicas. Foi observado um aumento progressivo tanto do número de cães recolhidos quanto do número de cães eutanasiados. Os valores para a razão habitante/cão média no período foram 3,16:1, 7,67:1, e 3,91:1 para a zona rural, urbana e o município todo, respectivamente, com predominância de cães machos (70,10%) e sem raça definida (80,71%), na população canina domiciliada. O crescimento anual médio da população canina domiciliada foi de 16,69%, e a maioria dos cães encontrava-se na zona rural (82,93%). A eutanásia e o recolhimento de cães não se mostraram efetivos, nos moldes em que foram aplicados, como mecanismos de controle populacional canino em Ibiúna. Os parâmetros da população canina estimados neste estudo servirão de auxílio para a elaboração de programas de controle tanto da população canina quanto de zoonoses, neste município. Os resultados observados chamam a atenção para aspectos relacionados à posse responsável, e sobre a importância do papel dos proprietários de animais na solução do problema do abandono de cães.

O presente estudo objetivou avaliar antígenos excretórios/secretórios (Ag E/S) e somáticos (Ag S) de Fasciola hepatica, anticorpos específicos e demonstrar a presença de sítios reativos em corte histológico do parasito adulto pela técnica de imunoistoquímica. A resposta imune foi observada pela reação intensa nas células que circundam a ventosa ventral do parasito. A técnica de imunoistoquímica é sensível e de fácil execução na detecção de sítios antigênicos em cortes histológicos de Fasciola hepatica.

Objetivou-se registrar os efeitos da inclusão de 0 ou 8% de fibra em detergente neutro na ração de suínos, sobre a histologia intestinal de suínos nas fases de creche e de crescimento-terminação. Foram utilizados suínos mestiços alimentados à vontade com rações isoprotéicas e isoenergéticas, em experimento inteiramente casualizado. Ao final de cada período, os animais foram abatidos, eviscerados e os cortes histológicos realizados. A ração fibrosa promoveu, na creche, significativo aumento da proporção volumétrica glandular na mucosa cecal; redução da proporção volumétrica ocupada pelas células caliciformes no epitélio do jejuno; aumento das áreas de células caliciformes produtoras de muco, presentes no epitélio glandular do jejuno, ceco e colo; além de aumento na intensidade do muco presente nas células caliciformes do duodeno e colo. Ao final da fase de terminação, os suínos alimentados com as dietas fibrosas, apresentaram aumento da proporção volumétrica glandular do epitélio do ceco, mas ligeira redução da área das células caliciformes produtoras de muco, no epitélio do colo. Estes dados sugerem uma adaptação, possivelmente um mecanismo de proteção, do epitélio à ação abrasiva exercida pelo oferecimento contínuo de fibra dietética na dieta de suínos, particularmente na fase creche.

Com objetivo de obter valores dos parâmetros do hemograma e de proteína plasmática total, de tartarugas marinhas da espécie Caretta caretta criadas em cativeiro, foram coletados cinco mililitros de sangue através de venopunção do seio venoso cervical dorsal de oito animais daquela espécie, utilizando como anticoagulante a heparina de sódio. Os achados hematológicos mostraram valores médios de eritrócitos de 275.000/µl (±28.030,59), volume globular de 33,12% (±2,35), concentração de hemoglobina de 8,65 g/dl (±0,80), enquanto que os índices hematimétricos encontrados foram de 725 fl (± 131,99) para volume globular médio (VGM), 198,18 pg (± 38,66) para hemoglobina globular média (HGM) e de 26,10% (± 1,21) para concentração de hemoglobina globular média (CHGM). No leucograma a média do número total de leucócitos foi de 3.656/µl (±963,04), e os valores médios relativos da contagem diferencial de leucócitos foram de 59,38% (±16.27) para heterófilos, 10,38% (±6,32) para eosinófilos, 0,13% (±0.35) para basófilos, 29,25% (±17,12) para linfócitos e 0,88% (±2,10) para monócitos, sendo os valores absolutos de 2.156,87/µl (±703,49); 366,88/µl (±216,44); 2,50/µl (±7,07); 1.110,94/µl (±783,61) e 19,06/µl (± 42,34), respectivamente. O valor médio de trombócitos encontrado foi igual a 10.968,13/µl (±3.109,19) e a determinação de proteína total teve uma média de 6,5 g/dl (±0,83). Das variáveis analisadas, a contagem de eritrócitos, o volume globular médio, a hemoglobina globular média e as contagens total e diferencial de leucócitos apresentaram valores diferentes para a espécie em questão, quando comparadas com a literatura consultada.

Infecção das estruturas umbilicais pode resultar em bacteremia, septicemia e morte em neonatos com falha na imunidade passiva sendo os microrganismos usuais de onfalites isolados freqüentemente em animais com bacteremia. Um estudo foi desenvolvido entre setembro 2002 e setembro 2003 utilizando-se 44 bezerros, visando verificar a freqüência de bacteremia em bezerros neonatos e a correlação entre os agentes isolados a partir de amostras de sangue de estruturas umbilicais. Amostras de sangue foram obtidas por punção da jugular e submetidas à cultura para isolamento de agentes microbianos, sendo 24 obtidas entre 48 e 72 horas e 20 entre o terceiro e o quinto dia após o nascimento. Através de "Swabs" procedeu-se à coleta de material das estruturas umbilicais para a mesma finalidade. Obteve-se crescimento microbiano em 17 (38,67%) amostras de sangue e 100% das amostras de estruturas umbilicais. Os microorganismos mais freqüentes em amostras de sangue foram Staphylococcus sp., E. coli, Bacillus spp, Pseudomonas sp. e Streptococcus. Todos os animais com bacteremia apresentaram manifestações de enfermidade focal ou sistêmica. O sinal clínico mais freqüentemente relacionado com cultura de sangue positiva foi o espessamento das estruturas umbilicais. Bacillus spp, Enterobacter spp, Micrococcus spp. e E. coli foram os microrganismos isolados das estruturas umbilicais. Os dados confirmam uma flora bacteriana mista nos casos de onfalite e sugerem uma prevalência alta de bacteremia em bezerros neonatos, sobretudo aqueles com onfalite, evidenciando a importância de boa transmissão de imunoglobulinas através do colostro. | Umbilical structures infections can be followed by bacteremic, septicemic infections and death in newborns with passive immunity deficiency. Microorganisms isolated in omphalitis have been also isolated from animals with bacteremia. From september/2002 to september/2003, a research was developed using 44 calves, in order to evaluate bacteremia frequency in newborns and to correlate microorganisms isolated from blood samples and umbilical structures. Blood samples were collected from jugular vein for microorganisms isolation. Twenty four samples were collected in a period of 24 to 48 hours, the other 20 samples from thirty to fifty days after birth. Umbilical structures materials were collected though swabs. Microbial growth occurred in 17 (38,67%) blood samples and in 100% of umbilical samples. Staphylococcus spp., E. coli, Bacillus spp, Pseudomonas spp. and Streptococcus spp were the major isolated microorganisms from blood. All bacteremic animals presented systemic or localized clinical manifestations. The most reported clinical sign was thickness of umbilical structures. Bacillus spp, Enterobacter spp, Micrococcus spp. and E. coli were isolated from umbilical structures. Data confirm a mixed bacterial environment in omphalitis, and suggest a high prevalence of bacteremic infections in newborns calves, pointing out the need of passive immunity transfer through colostrum.