Mavicyanin, a blue copper protein from Cucurbita pepo medullosa. Purification and characterization

Inglés. The copper protein mavicyanin has been isolated and purified from the green squash Cucurbita pepo medullosa. Mavicyanin contains one type-1 copper/18,000 M(, r), which can be characterized by: intense absorption maximum at 600 nm (E=5000 M('-1) cm('-1)/Cu, A(,280)/A(,600)=8.0+/-0.5, A(,600)/A(,403)=7.0+/-0.25), maximum of fluorescence emission at 335 nm. In the oxidized state the copper of mavicyanin is 100% detectable by electron paramagnetic resonance (EPR). Computer simulation of the rhombic EPR signal gives g(, z)=2.287, g(, y)=2.077, g(, x)=2.025, A(, z)=3.5 mT, A(, y)=2.9 mT and A(, x)=5.7 mT. Like other simple type-1 copper proteins, such as stellacyanin, azurin or plastocyanin, mavicyanin is readily reduced by hydroquinone or L-ascorbic acid. Its midpoint potential E'(, m) was determined to be +285 mV. The reduced protein reacts rather slowly with dioxygen, but is rapidly reoxidized by ferricyanide.

Italiano. La cuproproteina Mavicianina e stata isolata e purificata dalle bucce del frutto dello zucchino. La metallo proteina contiene un atomo di rame di tipo I ed ha un peso molecolare pari a 18.000 Dalton. Essa e caratterizzata da un massimo di assorbimento a 600 nm, E = 5000 M('-M) cm('-1)/Cu. I rapporti di assorbimento sono equali: tra 280 nm/600 nm 8+/-0,5, tra 600/403 7 +/- 0,25. Il massimo di emissione della luce fluorescente e a 335 nm. Allo stato ossidato l'atomo di rame e rivelabile al 100% con la tecnica della risonanza magnetica elettronica (EPR). La simulazione dello spettro EPR effettuata con il calcolatore da i seguenti parametri: g(, z) = 2.287, g(, y) =2.077, g(, x) = 2.025, A(, z) = 3.5 mT, A(, y) = 2,9 mT e A(, x) = 5,7 mT. Parimenti ad altre proteine che contengono un solo atomo di rame di tipo I, come la Stellacianina, Azzurrina e la Plastocianina, la Mavicianina e ridotta dall'idrochinone, dall'acido ascorbico. Il suo potenziale ossido-riducente E'(, m) e uguale a +285 mN. La metallo proteina ridotta reagisce lentamente con l'ossigeno, mentre viene rapidamente ossidata dal ferricianuro.