Análisis de la estabilidad genética de plantas de stylosanthes capitata vog: regeneradas “in vitro” utilizando marcadores RAPDs

Inglés. Legumes in Venezuela cover an area of an approximately 180.000 km², forming natural pasture savannas that act as a principal source of animal feeding and represents more than 60% of soils all over the country. Stylosanthes capitata Vog., has a high capacity to fasten nitrogen from the atmosphere, and very deep root systems that contribute with the fertility and stability of compact soils. However, the main disadvantage from these plants is their low sexual reproductive ratio, this has led to, the establishment of various in vitro regeneration processes which have been well developed and have permitted the production of big amounts of plants. Despite, all these advances this methodology, has not been evaluated regarding the stability of genetic regenerated plants of in vitro Stylosathes capitata Vog., which can be determinated by the use of molecular markers. In this research, genetic stability of Stylosanthes capitata Vog., was determined via RAPDs comparing DNA banding patterns of in vitro plants with mother plant. DNA extraction was made following Doyle and Doyle protocol, modified by Oropeza in 2001. For amplification, 9 arbitrary primers from the series OPC 15 to 23 (Invitrogen)were used, in a final volume of 25µl reaction. The results obtained demonstrated that all primers tested, produced sharp and reproducible bands originating DNA fragments ranging from 21220pb to 2000pb with a high genetic stability for regenerated plants from in vitro tissue culture.

Español; castellano. En Venezuela, las leguminosas cubren un área aproximada de 180.000 km² ubicadas sabanas tipo pastizales naturales lo que las hace el principal sustento en la alimentación de la ganadería de carne de la región y de más del 60% del país. Stylosanthes capitata Vog., en específico, posee una alta capacidad de fijar nitrógeno atmosférico y un sistema radicular muy profundo, contribuyendo a la fertilidad y estabilidad de los suelos compactos. Sin embargo, su principal desventaja está en que su tasa reproductiva para la obtención de semillas es muy baja. Ello ha propiciado el establecimiento de varios procesos de regeneración in vitro, los cuales se han desarrollado con gran éxito, obteniéndose gran cantidad de plantas. A pesar de estos avances, esta metodología no ha sido evaluada respecto a la estabilidad genética de las plantas regeneradas, la cual puede determinarse a través del uso de marcadores moleculares. En el trabajo, se estudió la estabilidad genética de plantas de S. capitata Vog., a partir de comparaciones de patrones de bandas de ADN amplificado al azar (RAPDs) entre la planta madre y las plantas “in vitro”, probándose 9 iniciadores de la serie OPC del 15 al 23 (Invitrogen) en un volumen final de reacción de 25 µl. Los resultados obtenidos mostraron amplificaciones de bandas nítidas y reproducibles originando fragmentos de ADN comprendidos entre 21220pb hasta 5000pb y los patrones de bandeo evidenciaron una alta estabilidad genética de las plantas regeneradas a partir del cultivo “in vitro”.