Identificação de marcadores moleculares para a competência ovocitária em células do Cumulus bovinas.

Portugués. Tese (Doutorado) - Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Brasília, DF. Orientadora: Margot Alves Nunes Dode, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.

Portugués. As células do cumulus exercem um importante papel durante o crescimento do ovócito, maturação, ovulação e fecundação e, portanto, influenciam a qualidade do ovócito. Com o objetivo de identificar genes diferencialmente expressos em células do cumulus (CC) bovinas foi realizado a análise de microarranjo, utilizando complexos cumulus-ovócitos (COCs) com diferentes graus de competência. Para isso foi utilizado o modelo do tamanho de folículo em que COCs competentes foram recuperados de folículos menor ou igual a 8,1 mm e incompetentes de folículos de 1-3 mm de diâmetro. Nessa análise, foram identificados 4.178 genes diferencialmente expressos (P<0,05) nas duas categorias de CCs. Dentre os genes diferencialmente expressos utilizou-se um critério de corte adicional em que somente aqueles com 2,5x fold para mais ou menos foramconsiderados. Foi, então, gerada uma lista preliminar de 143 genes mais expressos e 80 genes menos expressos em CCs de folículos competentes em relação aos incompetentes, que poderiam possivelmente estar envolvidos com a aquisição da competência ovocitária. Esses genes foram investigados de acordo com suas respectivas funções celulares e a maioria deles foi classificada como relacionados às funções do ciclo celular, ovulação e inflamação, reparo de DNA, metabolismo de energia, metabolismo de aminoácidos, sinalização celular e meiose. Três vias moleculares envolvendo esses genes foram discutidas. Seis desses genes candidatos a potenciais marcadores (FGFll, IGFBP4, SPRY1, ARHGAP22, COLI8A1 e GPC4) foram selecionados para validação por qPCR em células do cumulus obtidas de folículos de 1-3, 6-8 e menor ou igual a 8,1 mm de diâmetro. Dos genes validados, três deles (COLI8Al, GPC4 e IGFBP4) confirmaram a expressão diferencial detectada no microarranjo (P<O,05). Entretanto, somente o GPC4 apresentou expressão diferencial entre os folículos mais competentes, 6-8 e menor ou igual a 8,1 mm, em relação aos menos competentes de 1-3 mm, podendo,portanto, ser utilizado como marcador para predizer a competência dos ovócitos.