Identification and characterization of an American plum line pattern virus isolate from Palestine [Prunus salicina Lindl. - Israel]

Inglés. In a recent survey of the sanitary status of stone fruits in Palestine, a virus (isolate PL27) was transmitted to Nicotiana occidentalis by mechanical inoculation from Japanese plum. Purified virus consisted of quasi-spherical particles 26-35 nm in diameter which sedimented as 3-4 components in density gradient centrifugation. Virus coat protein had an estimated molecular mass of ca. 25 kDa, while four encapsidated RNA bands were visible in electrophoregrams of purified nucleic acid. The nucleotide sequence of a 385 bp PCR-generated amplicon from RNA-3 was determined, showing 99% identity at the nucleic acid level and 98.9% similarity at the aminoacid sequence level with a previously characterized RNA-3 region of American plum line pattern virus (APLPV). A digoxigenin-labelled probe was synthesized which specifically recognized virus isolates in extracts from herbaceous and woody samples, but did not cross-hybridize with Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV), Apple mosaic virus (ApMV) and Prune dwarf virus (PDV). An antiserum to PL27 was raised, which recognized homologous antigens but not PDV and PNRSV. An ELISA kit prepared with this antiserum was successfully used for the detection of PL27 in infected Prunus species. Based on particle morphology and biological, serological and molecular properties, PL27 was identified as an isolate of APLPV

Italiano. [Nel corso di una recente indagine sullo stato sanitario delle prunoidee da frutto in Palestina, e' stato trasmesso un virus (isolato PL27) a Nicotiana occidentalis mediante inoculazione meccanica dal susino giapponese. Il virus purificato consisteva in particelle pressoche' sferiche del diametro di 26-35 nm, che sedimentavano in 3-4 componenti a seguito di centrifugazione in gradiente di densita'. La proteina di rivestimento del virus aveva una massa molecolare stimata pari a circa 25 kDa, mentre in elettroforetogrammi di acido nucleico purificato erano visibili 4 bande di RNA encapsidato. E' stata determinata la sequenza nucleotidica di un amplicone di 385 bp generato mediante PCR da RNA-3; esso presentava un'identita' del 99%, a livello dell'acido nucleico, e del 98,9%, per quanto riguardava la sequenza degli aminoacidi, con una regione RNA-3 di American plum line pattern virus (APLPV) caratterizzata precedentemente. E' stata sintetizzata una sonda marcata con digossigenina che identificava specificamente isolati virali in estratti derivanti da campioni di specie erbacee e legnose, ma non si ibridava con il Virus delle maculature necrotiche ad anello del susino (PNRSV), con il Virus del mosaico del melo (ApMV) e con il Virus del nanismo del susino. E' stato prodotto un antisiero per PL27, che riconosceva antigeni omologhi, ma non PDV e PNRSV. Un kit ELISA preparato con tale antisiero e' stato utilizzato con successo per l'identificazione di PL27 nelle specie di Prunus infette. In base alla morfologia delle particelle e alle proprieta' biologiche, sierologiche e molecolari, PL27 e' stato identificato come isolato di APLPV]