Plasma and urinary metanephrine and normetanephrine in healthy cats : a pilot study

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária, área científica de Clínica

PLASMA AND URINARY METANEPHRINE AND NORMETANEPHRINE IN HEALTHY CATS – A PILOT STUDY - Feline pheochromocytoma (PCC) is considered to be rare and literature is limited to a few case-reports. In humans and dogs, biochemical diagnosis of a PCC is based on the measurements of plasma (PL) and/or urinary (U) metanephrine (MN) and normetanephrine (NMN) but little is known about these biomarkers in cats. This pilot study aims to evaluate the feasibility of PL-MN/NMN and U-MN/NMN measurement in cats, using liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MSMS). Furthermore, it intends to assess the U-MN/NMN stability under refrigeration (+4ºC) for 24h. A cross-sectional pilot study was conducted, using a group of 10 healthy cats, with ages ranging from 4 to 10 years. After sampling, EDTA-plasma and urine samples were stored at - 80ºC until measurement of PL-MN/NMN and U-MN/NMN. For each cat, an additional urine sample was refrigerated (UR) for 24h before storage at -80ºC. Leftover plasma and urine samples collected from a cat with a confirmed diagnosis of PCC (PheoCat) were also submitted for analysis. Urinary creatinine (Creat) was measured in the same spot urine samples in order to calculate U-MN/Creat and U-NMN/Creat ratios. With regard to the population of healthy adult cats, the PL-MN and PL-NMN median values were 2.73nmol/L (IQR=2.37) and 7.02nmol/L (IQR=5.2), respectively. U-MN/Creat and U-NMN/Creat ratios had medians of 70μg/g (IQR=70) and 139μg/g (IQR=77), respectively. Results obtained from the PheoCat revealed a PL-MN of 3.68nmol/L, PL-NMN of 66.27nmol/L, U-MN/Creat ratio of 179 μg/g and U-NMN/Creat ratio of 1262 μg/g. None of these values overlapped with the medians obtained from the healthy cats. The U-MN/NMN proved to be stable under refrigeration for 24h, as there was no statistical difference between U-MN vs URMN and U-NMN vs UR-NMN (p= 0.329 and p= 0.813, respectively). This is the first study reporting both PL-MN/NMN and U-MN/NMN measurements by LC-MS-MS in adult healthy cats and will contribute to the biochemical diagnosis of feline PCC in the future. The PheoCat had a substantial increase in all the measured parameters, particularly PL-NMN and U-NMN/Creat ratio, when compared to the healthy cats, highlighting the clinical applicability of these biomarkers in the diagnosis of PCC in cats.

RESUMO - METANEFRINAS E NORMETANEFRINAS PLASMÁTICAS E URINÁRIAS EM GATOS SAUDÁVEIS – UM ESTUDO-PILOTO - O feocromocitoma (PCC) felino é considerado raro e a literatura é limitada a poucos relatos de casos clínicos. Em humanos e cães, o diagnóstico bioquímico de PCC é baseado na medição de metanefrinas (MN) e normetanefrinas (NMN) plasmáticas (PL) e/ou urinárias (U), mas pouco se sabe sobre estes biomarcadores em gatos. Este estudo piloto tem como objetivo avaliar a viabilidade da medição das PL-MN/NMN e U-MN/NMN em gatos, utilizando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em tandem (LC-MS-MS). Além disso, pretende aferir a estabilidade das U-MN/NMN sob refrigeração (+4ºC) por 24h. Foi realizado um estudo piloto transversal, utilizando um grupo de 10 gatos saudáveis, com idades entre os 4 e 10 anos. Amostras de EDTA-plasma e urina foram imediatamente armazenadas a -80ºC após colheita, até à medição das PL-MN/NMN e U-MN/NMN. Para cada gato, uma amostra de urina adicional foi refrigerada (UR) por 24h antes do armazenamento a -80ºC. Amostras de plasma e urina coletadas de um gato com diagnóstico definitivo prévio de PCC (PheoCat) também foram submetidas para análise. A creatinina urinária (Creat) foi medida nas mesmas amostras de urina para calcular os rácios U-MN/Creat e U-NMN/Creat. Relativamente à população de gatos adultos saudáveis, a mediana das PL-MN e PLNMN foi 2,73nmol/L (IQR=2,37) e 7,02nmol/L (IQR=5,2), respetivamente. Os rácios UMN/Creat e U-NMN/Creat tiveram medianas de 70μg/g (IQR=70) e 139μg/g (IQR=77), respetivamente. O PheoCat teve valores de PL-MN de 3,68nmol/L, PL-NMN de 66,27nmol/L, rácio U-MN/Creat de 179 μg/g e rácio U-NMN/Creat de 1262 μg/g. Nenhum destes valores se sobrepôs às medianas obtidas nos gatos saudáveis. As U-MN/NMN revelaram ser estáveis sob refrigeração por 24h, uma vez que não houve diferença estatística entre U-MN vs UR-MN e U-NMN vs UR-NMN (p= 0,329 e p= 0,813, respetivamente). Este é o primeiro estudo que afere as PL-MN/NMN e U-MN/NMN por LC-MS-MS em gatos adultos saudáveis e contribuirá para o diagnóstico bioquímico de PCC felino no futuro. O PheoCat teve um aumento substancial de todos os parâmetros medidos quando comparado com os gatos saudáveis, principalmente da PL-NMN e rácio U-NMN/Creat, destacando a aplicabilidade clínica destes biomarcadores no diagnóstico de PCC em gatos.

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