Cultivo de células amnióticas durante diferentes idades gestacionais para análise do cariótipo em bovinos

A cariotipagem em bovinos é uma importante ferramenta diagnóstica. Pode ser utilizada no período prenatal para diagnóstico de várias anormalidades cromossômicas, tais como translocações Robertsonianas, síndrome da feminilização testicular, disgenesia gonadal e síndrome de Klinefelter. O fluido amniótico é uma importante fonte de células para cariotipagem e tem sido extensivamente utilizado para humanos mas não para bovinos, apesar de seu valor diagnóstico. Uma vez que pequena porcentagem dessas células é viável, suas condições de crescimento, assim como o processamento do material, devem ser otimizadas para se assegurar uma análise bem sucedida. Para tanto, comparamos a eficiência de crescimento de amniócitos bovinos em dois meios de cultura, usando células de 10 a 14 semanas de gestação. Os amniócitos foram cultivados no meio Amniomax (Gibco-BRL/ Life Technologies, Rockville, MD USA) durante onze dias e no meio RPMI (Gibco-BRL) durante dezesseis dias a 37ºC e 5% CO2, fixados e corados de acordo com a técnica GTG de bandeamento. Todas as culturas no meio RPMI apresentaram baixo crescimento celular, independente da idade gestacional. Das amostras cultivadas em Amniomax, uma apresentou 100% de confluência celular no 11ºdia de cultivo (10 semanas de gestação) e as outras apresentaram proliferação maior em relação àquelas cultivadas em RPMI. O líquido amniótico proveniente de gestações entre 10 e 12 semanas deve ser utilizado para se assegurar uma boa qualidade de material para cariotipagem. Além disso, deve-se atentar para os passos durante o processamento para melhor visualização das metáfases - choque hipotônico e tempo de tripsina.