O objetivo do presente estudo foi avaliar se a composição proteica de plasma seminal, verificada por eletroforese bidimensional (2DE), pode interferir na congelabilidade do sêmen de touros, e se existe a possibilidade de predizer tal característica em touros doadores de sêmen. Amostras de 20 touros (diferentes raças) com mínimo de três anos de histórico de produção em Central de Coleta de sêmen foram coletadas. Todos os touros tinham de 2 a 7 anos de idade. A congelabilidade do sêmen foi calculada por no de ejaculados aprovados pós-descongelação / no de ejaculados submetidos à congelação (depois do crivo do padrão de qualidade da empresa para aprovar o ejaculado para ser submetido a congelação). Os touros foram divididos em três grupos: ALTA (=>80% aproveitamento de ejaculados encaminhados à congelação); MÉDIA (>60 a 79% ejaculados aprovados) e BAIXA (=<59% ejaculados aprovados). Sessenta e oito corridas de géis 2DE foram avaliadas nas amostras de plasma seminal, que detectaram 225 spots com quantidade de proteína diferente entre as mesmas (VION). Pela estatística utilizada, comparando-se a congelabilidade do sêmen com quantidade de proteína detectada de cada spot (VION), constatou-se que 2 spots apresentaram-se com quantidade significativa de proteína diferente entre os dois grupos de congelabilidade do sêmen, considerando spots que foram detectados em mais de 75% das amostras corridas. Os touros taurinos apresentaram perfil proteico mais homogêneo quando comparado com os zebuínos, considerando número e frequência de spots. Tais resultados demonstram um potencial para uso da proteômica como ferramenta preditiva da congelabilidade do sêmen de touros, porém com necessidade de maiores estudos, principalmente para melhor compreensão de interações proteicas entre membrana espermática, plasma seminal e diluidores de sêmen utilizados, já que podem interferir no fenótipo proteico avaliado e na congelabilidade do sêmen, seja de forma positiva ou negativa. | The present study was undertaken the protein composition in 2D-electrophoretic pattern (2DE) of the seminal plasma (SP) can interfere in the semen bull freezability, and if we can use that for predicting semen bull freezability. Samples were obtained of 20 bulls (different breeds) with a minimum of 3 years history semen production in commercial semen collection Center. All animals ranged between 2 - 7 years of age. The semen freezability was calculated by # of thawed and approved ejaculates / # of ejaculates submitted to cryopreservation (after semen evaluation and approved to submitted to freeze). The bulls were divided in 3 groups: HIGH (=>80% ejaculates approved); MEDIUM (>60% and <79% ejaculates approved); LOW (=<59% ejaculates approved); the pattern and criteria were the same used in the routine of the commercial semen Center. 68 gels were carried through by 2DE of SP samples indicated 225 detected spots with protein different amount (VION) comparing. Comparing bull´s semen freezability and VION of each spot found difference among 2 spots from High and Low, even considering just spots with % of detection frequency bigger than 75%. The taurine bulls demonstrated more homogeneous profile when comparing with zebu bulls, considering number and frequency of appearance of spots. The results showed that proteomics can be a useful tool to predict the semen freezability, but we´ll need to study better the interactions between sperm membrane, seminal plasma and extender to comprehend better which proteome phenotype interfere positive or negatively in the semen freezability.

Em fêmeas bovinas, a liberação de prostaglandina F2α (PGF2α) é induzida in vivo pelo estradiol (E2). Acredita-se que o E2 estimule a síntese de proteínas essenciais na produção de PGF2α. Objetivou-se avaliar o efeito do E2 no incremento da concentração de proteínas totais e na modificação da composição proteica em explantes endometriais de fêmeas bovinas tratadas com E2 no 17º dia do ciclo estral. Novilhas cruzadas foram tratadas no 17º dia do ciclo estral, via intravenosa, com 0 mg (Grupo Controle; n = 6) ou 3 mg de E2 (Grupo E2; n = 6) e abatidas duas horas após. Explantes endometriais foram isolados, submetidos à extração de proteínas totais, quantificados e avaliados por Eletroforese Unidimensional em gel de poliacrilamida 10% SDS-PAGE. A concentração de proteínas totais não diferiu entre os grupos, 6296,10 + 439,90 µg/mL para o Grupo Controle e 8426,56 + 1156,00 µg/mL para o Grupo E2 (p = 0,1158). Não houve diferença significativa (p > 0,05) no perfil proteico dos explantes endometriais em géis corados com Coomasie Blue. Em géis corados com Nitrato de Prata verificou-se no Grupo E2 maior porcentagem relativa das bandas referentes ao peso molecular de 75 a 76 kDa (8,40% vs. 4,89%; no Grupo E2 e Controle respectivamente; p < 0,05) e 108 a 110 kDa (6,85% vs. 3,84%; no Grupo E2 e Controle respectivamente; p < 0,05). Observou-se no Grupo E2 menor porcentagem relativa da banda referente ao peso molecular de 90 kDa (5,78% vs. 9,83%; no Grupo E2 e Controle respectivamente; p < 0,05). Conclui-se que o E2 não incrementa a concentração de proteínas no endométrio, entretanto, altera a composição proteica nos explantes endometriais, indicando que o E2 altera a expressão de proteínas específicas.

O objetivo do presente estudo foi avaliar se diferentes formas de cultivo interferem no efeito do óxido nítrico (NO) sobre a maturação e a integridade da membrana plasmática do complexo cumulus-oócito de bovinos. Para tanto, realizou-se cultivo em gotas sob óleo mineral ou em placas de quatro poços com a adição de diferentes concentrações de nitroprussiato de sódio (SNP, doador de óxido nítrico). Não foi observada diferença (P &gt; 0,05) entre as formas de cultivo quando se avaliou a integridade de membrana plasmática e a expansão das células do cumulus (CC). Contudo, os oócitos dos grupos controle e os cultivados na presença de 10-3 M de SNP, ambos cultivados em placa, apresentaram maior porcentagem de membrana íntegra do que os mesmos tratamentos cultivados em óleo mineral (P &lt; 0,05). Observou-se que a adição de 10-3 M de SNP diminuiu o grau de expansão das CC e de integridade da membrana plasmática dos oócitos, tanto no cultivo em gota sob óleo quanto em placa, diferindo dos outros grupos (P &lt; 0,05). Semelhante à expansão, a forma de cultivo não interferiu na extrusão do primeiro corpúsculo polar, sendo que a adição de 10-3 M de SNP inibiu a extrusão em ambos os sistemas (P &lt; 0,05). Houve um efeito dose-resposta na concentração de NO no meio de maturação em ambos os tipos de cultivo (P &lt; 0,05), sendo que esta foi maior no meio de cultivo sob óleo, exceção feita quando se adicionou 10-3 M de SNP, tratamento no qual não houve diferença nos tipos de cultivo empregados. Estes dados mostram que o sistema de cultivo não interferiu na ação do NO na maturação in vitro de COC bovinos, mas interfere na integridade da membrana plasmática do oócito. | The aim of the present study was to evaluate the influence of different forms of in vitro culture on the nitric oxide action in maturation and membrane integrity on bovine cumulus-oocyte complex. No significant effect was observed between different forms of culture (mineral oil vs plate; P &gt; 0.05), as much for membrane integrity as for expansion of the CC. However, it was observed that oocytes of the groups control and 10-3 M of SNP, cultivated in plate, had presented greater percentage of cell with maintenance of membrane integrity than same treatments cultivated in drop. The addition of 10-3 M of SNP showed an inhibitory effect on the expansion and membrane integrity of CC and oocytes in both, culture in drops under oil and plate (P < 0.05). The culture form did not intervene with the extrusion of the first polar corpuscle and the addition of 10-3 M of SNP inhibited this extrusion in the both systems (P < 0.05). There was a dose-response effect on the concentration of NO in the maturation medium in both types of cultivation (P < 0,05), and this was higher in the culture medium under oil, except when added 10-3 M of SNP, treatment in which there was no difference in the types of cultivation employed. (P<0.05). These data demonstrate that the culture system did not intervene with the action of the NO in the maturation in vitro of bovine COC, but intervened with the integrity of the plasmatic membrane of the oocyte.

Em fêmeas bovinas, a liberação de prostaglandina F2α (PGF2α) é induzida in vivo pelo estradiol (E2). Acredita-se que o E2 estimule a síntese de proteínas essenciais na produção de PGF2α. Objetivou-se avaliar o efeito do E2 no incremento da concentração de proteínas totais e na modificação da composição proteica em explantes endometriais de fêmeas bovinas tratadas com E2 no 17º dia do ciclo estral. Novilhas cruzadas foram tratadas no 17º dia do ciclo estral, via intravenosa, com 0 mg (Grupo Controle; n = 6) ou 3 mg de E2 (Grupo E2; n = 6) e abatidas duas horas após. Explantes endometriais foram isolados, submetidos à extração de proteínas totais, quantificados e avaliados por Eletroforese Unidimensional em gel de poliacrilamida 10% SDS-PAGE. A concentração de proteínas totais não diferiu entre os grupos, 6296,10 + 439,90 µg/mL para o Grupo Controle e 8426,56 + 1156,00 µg/mL para o Grupo E2 (p = 0,1158). Não houve diferença significativa (p &gt; 0,05) no perfil proteico dos explantes endometriais em géis corados com Coomasie Blue. Em géis corados com Nitrato de Prata verificou-se no Grupo E2 maior porcentagem relativa das bandas referentes ao peso molecular de 75 a 76 kDa (8,40% vs. 4,89%; no Grupo E2 e Controle respectivamente; p &lt; 0,05) e 108 a 110 kDa (6,85% vs. 3,84%; no Grupo E2 e Controle respectivamente; p &lt; 0,05). Observou-se no Grupo E2 menor porcentagem relativa da banda referente ao peso molecular de 90 kDa (5,78% vs. 9,83%; no Grupo E2 e Controle respectivamente; p &lt; 0,05). Conclui-se que o E2 não incrementa a concentração de proteínas no endométrio, entretanto, altera a composição proteica nos explantes endometriais, indicando que o E2 altera a expressão de proteínas específicas. | In bovine females the release of prostaglandin F2&#945; (PGF2&#945;) is induced in vivo by estradiol (E2). It is believed that E2 stimulates the synthesis of essential proteins for the production of PGF2&#945;. This study aimed to evaluate the effect of E2 in increasing the concentration of total protein and modifying the protein composition of endometrial explants from bovine females treated with E2 at the 17th day of estrous cycle. Crossbred heifers were treated at 17th day of estrous cycle intravenously with 0 mg (Control Group; n = 6) or 3 mg of E2 (E2 Group; n = 6) and killed two hours after. Endometrial explants were isolated, subjected to extraction of total protein, quantified and were analyzed by one-dimensional electrophoresis on polyacrylamide gel 10% SDS-PAGE. The concentration of total protein did not differ between groups, 6296.10 + 439.90 µg/mL for the Control Group and 8426.56 + 1156.00 µg/mL for E2 Group (p = 0.1158). There was no significant difference (p &gt; 0.05) in the protein profile of endometrial explants in gels stained with Coomasie Blue. In gels stained with Silver Nitrate it was verified in E2 Group greater relative percentage of the bands referring to the molecular weight of 75 to 76 kDa (8.40% vs. 4.89% in E2 Group and Control respectively; p < 0.05) and 108 to 110 Kda (6.85% vs. 3.84% in E2 Group and Control respectively, p < 0.05). It was observed in E2 Group lower relative percentage of the band referring to the molecular weight of 90 kDa (5.78% vs. 9.83% in E2 Group and control respectively; p < 0.05). We concluded that the E2 does not increase the protein concentration in the endometrium, however, it modifies the proteinic composition in the endometrial explants, indicating that E2 alters the expression of specific proteins.

O presente estudo se baseou em levantamento retrospectivo obtidos de bovinos abatidos em frigorífico paulista. Foram utilizados os registros do Serviço de Inspeção Federal de ocorrência de alterações hepáticas em 1.568.821 bovinos (85% machos e 15% fêmeas), proveniente de seis Estados (SP, MS, PR, GO, MT e MG) durante os anos de 2002 a 2006. Consideraram-se os animais abatidos no último trimestre de cada ano como terminados em confinamento, sendo os demais criados continuamente em regime extensivo. Os abscessos hepáticos (1,60%) foram a segunda mais frequente alteração hepática após a teleangectasia (1,67%). A frequência desses abscessos foi maior em bovinos confinados (2,54%) que nos criados extensivamente (1,28%) e em fêmeas (1,85%) que em machos (1,56%). O confinamento aumenta o fator de risco (FR) de surgimento de abscessos hepáticos na ordem de 2,01 vezes. Maior frequência de abscessos foi registrada em bovinos oriundos do Paraná, em ambos os sistemas de terminação.

Durante o período crítico do reconhecimento materno, compreendido entre o 15º e 19º dias da gestação, o concepto deve sintetizar competentemente moléculas capazes de bloquear a síntese de prostaglandina F2α (PGF2α) e a luteólise. Em bovinos, a principal macromolécula protéica envolvida em tal bloqueio é o interferon-tau (IFN-τ). Durante o período crítico, falhas neste reconhecimento determinam à mortalidade embrionária em até 40% das fêmeas inseminadas. Informações sobre o IFN-τ em animais Bos taurus indicus, ainda são restritas. Este estudo objetivou uma avaliação quantitativa do IFN-τ durante o período crítico do reconhecimento materno, em lavados uterinos obtidos por sonda de Foley (dias 14, 16 e 18 pósestro) ou post-mortem (dia 18 pós-estro). Para tanto, foram utilizadas fêmeas multíparas azebuadas (Bos taurus indicus), cíclicas ou prenhes, nos dias 14, 16 e 18 pós-estro. Para a obtenção dos lavados, os úteros foram infundidos com solução de Ringer Simples. Os lavados foram concentrados por ultra-filtração e liofilizados. As macromoléculas protéicas foram separadas por Eletroforese Unidimensional SDSPAGE, em gel com 15% de poliacrilamida. A quantificação do IFN-τ nos lavados uterinos foi realizada por Western-Blotting e densitometria. Tanto nos lavados obtidos por sonda de Foley quanto nos post-mortem foi possível observar bandas de proteínas que apresentaram reação cruzada com os anticorpos utilizados no Western-Blotting. O IFN-τ foi detectado apenas nos lavados uterinos post-mortem de vacas prenhes (P&lt;0,05). A densidade óptica não foi afetada pelo dia do período crítico, estado (cíclico ou prenhe) ou interação dia x estado. Nos lavados post-mortem não houve efeito de peso do concepto ou concentração de progesterona plasmática no dia do lavado na densidade da banda protéica referente ao IFN-τ . Concluiu-se que a detecção e quantificação do IFN-τ no ambiente uterino de vacas azebuadas, nestas condições experimentais, é possível apenas em lavados uterinos obtidos post-mortem. | During the critical period of the maternal recognition, which occurs between days 15 and 19 of pregnancy, the conceptus must competently synthesize molecules capable of blocking the synthesis of prostaglandin F2α (PGF2α) and luteolysis. In cattle, the major macromolecule involved in suck blockage is the protein interferon-tau (IFN-τ). During the critical period, failures in the recognition of pregnancy determine embryonic mortality on up to 40% of inseminated cows. Data about IFN-τ in Bos taurus indicus are still scarce. Objective of this study was to quantitatively evaluate the presence of IFN-τ during the critical period for maternal recognition of pregnancy in uterine flushings obtained in vivo by Foley catheter (Days 14, 16 and 18 post estrus) or post-mortem (Day 18 post estrus). Multiparous, cyclic or pregnant zebu cows (Bos taurus indicus) on days 14, 16 and 18 post estrus were used for in vivo or post mortem uterine flushing collection. In both cases, a Ringer solution was used to wash the uterus of cows. Uterine flushings were concentrated by ultra-filtration and lyophilized. Proteins were separated by one-dimensional electrophoresis (SDS-PAGE) in a 15% polyacrilamide gel. Interferon-tau quantification in uterine flushings was performed by western blotting and densitometry. Non-specific protein bands were observed in both in vivo and post mortem uterine flushings. Interferon-tau was detected only in uterine flushings obtained from pregnant cows post-mortem (P&lt;0.05). Optical density of protein bands was not affected by the day of the critical period, state (cyclic or pregnant) or interaction day x state. There was no effect of the conceptus weight or progesterone concentration on the day of uterine flushing collection in the optical density of the IFN-τ protein band. It was concluded that the detection and quantification of IFN-τ in the uterine environment of zebu cows, in these experimental?conditions, is only possible in uterine flushings obtained post-mortem.

The objective of this study is to use different in vitro culture systems of preantral follicles from Nelore breed bovine fetuses in the last gestation quarter. The evaluation of treatments considered the time of growth of isolated follicles. Preantral follicles were mechanically isolated and submitted to the individual culture, for 9 days, in media no supplemented or supplemented with fetal calf serum (FCS), bovine serum albumin (BSA) or synthetic defined supplement substitute of serum KnockoutSR (KNO). We have also evaluated the effects of collagen gel or fetal calf fibroblast monolayer as substratum for in vitro cultures. The increase on the follicular diameter was followed in the first day (0 h), at the 72 h, 144 h and 216 h. Considering cultures of isolated follicles, the results have shown that the association between media supplemented with FCS and collagen gel was significantly more efficient on the increase of the follicular diameter than other treatments. It is not still established a system of appropriate cultivation that sustains the differentiation and multiplication of the granular cells and that maintains the contact of the same ones with the oocyte to provide molecules and factors that supply the metabolic demand. We also understand that our results also represent another promising step on the search for the ultimate system of in vitro culture of preantral follicles from bovines. | O objetivo deste estudo foi aplicar diferentes sistemas de cultivo in vitro para folículos pré-antrais de fetos bovinos da raça Nelore no último trimestre de gestação e para identificar o sistema mais eficiente durante o crescimento dos folículos isolados. Para isso, folículos pré-antrais foram isolados mecanicamente e submetidos ao cultivo individual, por 9 dias, em meio não suplementado ou suplementado com soro fetal bovino (SFB), albumina sérica bovina (BSA) ou suplemento definido sintético substituto do soro KnockoutSR (KNO). Avaliou-se ainda, o efeito do gel de colágeno ou monocamada de fibroblastos fetais bovinos como substrato para o cultivo in vitro. A avaliação do aumento de diâmetro folicular foi realizada no dia da colheita (0 hora) e a cada 72 horas de cultivo. A associação entre meio suplementado com SFB e uso de gel de colágeno como substrato foram significativamente mais efetivos sobre o aumento do diâmetro folicular quando comparados aos demais tratamentos. Quando fragmentos de tecido ovariano foram submetidos ao cultivo in vitro, não houve preservação da ultraestrutura folicular por mais de 3 dias de cultivo, em qualquer dos tratamentos utilizados. Ainda não está estabelecido um sistema de cultivo adequado que sustente a diferenciação e multiplicação das células da granulosa e que mantenha o contato das mesmas com o oócito para prover moléculas e fatores que supram a demanda metabólica. Entendemos que esta pesquisa apresentou avanços promissores na busca pelo estabelecimento um sistema de cultivo in vitro de folículos pré-antrais em bovinos.

Dezoito novilhos mestiços, com idade entre 16 e 20 meses, foram submetidos à remoção do ligamento apical do pênis para provocar o seu desvio. Decorridos 60 dias os animais foram colocados em presença de fêmeas em estro, sendo verificado formação de desvios ventral e lateral direito do pênis, com incapacidade de cópula. Os bovinos foram submetidos ao transplante autólogo de um segmento do tendão da porção superficial do músculo flexor superficial dos dedos, sobre a túnica albugínea, substituindo o ligamento apical do pênis removido. Observou-se a presença de poucas células mononucleares, polimorfonucleares e células gigantes e formação de tecido conjuntivo fibroso, ocasionando aderências resistentes e capacidade de sustentar a extremidade livre do pênis. Os bovinos, quando em presença de fêmeas em estro, não apresentaram desvio de pênis e modificações do comportamento sexual. A técnica mostrou ser eficaz, podendo ser indicada para corrigir desvio de pênis ventral e lateral de bovinos.

Cerca de 50% dos ácidos graxos voláteis (AGV) produzidos no ruminoretículo são absorvidos nesse compartimento e outros 50% passam com a fase fluida para o omaso e são absorvidos antes do duodeno. O objetivo deste trabalho foi mensurar a superfície de absorção do ruminoretículo e do omaso comparando-as com a magnitude de absorção. Oito bovinos adultos tiveram seu estômago removido imediatamente após o abate. Os compartimentos do estômago foram separados, pesados e tiveram fragmentos coletados em diversas regiões anatômicas. Procedeu-se a mensuração da área total da superfície interna por meio de captura e análise de imagens digitalizadas. A superfície absortiva do ruminoretículo (7,7 m²) foi maior (P<0,001) do que a do omaso (2,1 m²). A relação superfície/digesta, entretanto, foi maior (P=0,07) no omaso (0,22 m²/Kg) que no ruminoretículo (0,12m²/Kg), representando uma área superficial 83,3% maior no omaso por unidade de digesta. A área de um fragmento do saco ventral do rúmen apresentou correlação positiva (0,84) com a área total da superfície do rúmen, indicando ser possível a estimativa da área total do órgão por meio de biópsia. A superfície absortiva dos compartimentos parece ser compatível com a magnitude de absorção, entretanto, estudos que comparem a taxa fracional de absorção de AGV entre os compartimentos devem ser realizados.

About 50% of volatile fatty acids (VFA) produced in the reticulorumen are absorbed in this compartment. The other 50% pass with the fluid phase to the omasum and are absorbed before the duodenum. The objective of this experiment was to measure the absorption surface of the reticulorumen and omasum aiming to compare it with the absorption magnitude. Eight adult bovines had their stomachs removed immediately after slaughtering. The stomach compartments were separated and weighed. Fragments were collected from several anatomical regions. Measurements of the total area of the internal surface were taken through image capture and analysis. The reticulorumen absorptive surface (7.7 m²) was larger (P<0.001) than the omasum absorptive surface (2.1 m²). The surface/digest ratio, however, was larger (P=0.07) in the omasum (0.22 m²/kg) than in the reticulorumen (0.12m²/kg), representing an omasum surface area for each digest unit 83.3% larger. The area of one of the rumen ventral sac fragments showed a positive correlation (0.84) with the total rumen surface area, indicating that it is possible to estimate the total rumen area by biopsy. The absorptive surface of the forestomach compartments seem to be compatible with absorption magnitude. However, further studies comparing VFA fractional absorption rate among forestomach compartments should be carried out. | Cerca de 50% dos ácidos graxos voláteis (AGV) produzidos no ruminoretículo são absorvidos nesse compartimento e outros 50% passam com a fase fluida para o omaso e são absorvidos antes do duodeno. O objetivo deste trabalho foi mensurar a superfície de absorção do ruminoretículo e do omaso comparando-as com a magnitude de absorção. Oito bovinos adultos tiveram seu estômago removido imediatamente após o abate. Os compartimentos do estômago foram separados, pesados e tiveram fragmentos coletados em diversas regiões anatômicas. Procedeu-se a mensuração da área total da superfície interna por meio de captura e análise de imagens digitalizadas. A superfície absortiva do ruminoretículo (7,7 m²) foi maior (P<0,001) do que a do omaso (2,1 m²). A relação superfície/digesta, entretanto, foi maior (P=0,07) no omaso (0,22 m²/Kg) que no ruminoretículo (0,12m²/Kg), representando uma área superficial 83,3% maior no omaso por unidade de digesta. A área de um fragmento do saco ventral do rúmen apresentou correlação positiva (0,84) com a área total da superfície do rúmen, indicando ser possível a estimativa da área total do órgão por meio de biópsia. A superfície absortiva dos compartimentos parece ser compatível com a magnitude de absorção, entretanto, estudos que comparem a taxa fracional de absorção de AGV entre os compartimentos devem ser realizados.